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蛋白質(zhì)互作技術(shù)

2021-10-21 10:41 作者:Cas9X海星生物 0人讀過(guò) | 我要投稿

蛋白質(zhì)是組成人體一切細(xì)胞、組織的重要成分。機(jī)體所有重要的組成部分都需要有蛋白質(zhì)的參與。正是因?yàn)榈鞍踪|(zhì)的重要作用，所以蛋白質(zhì)也一直是科研工作者研究的熱門對(duì)象，本次小海星就為大家介紹一下蛋白質(zhì)互作技術(shù)。

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酵母雙雜交系統(tǒng)

酵母雙雜交系統(tǒng)是當(dāng)前廣泛用于蛋白質(zhì)相互作用組學(xué)研究的一種重要方法。其原理是當(dāng)靶蛋白和誘餌蛋白特異結(jié)合后，誘餌蛋白結(jié)合于報(bào)道基因的啟動(dòng)子，啟動(dòng)報(bào)道基因在酵母細(xì)胞內(nèi)的表達(dá)，如果檢測(cè)到報(bào)道基因的表達(dá)產(chǎn)物，則說(shuō)明兩者之間有相互作用，反之則兩者之間沒有相互作用。將這種技術(shù)微量化、陣列化后則可用于大規(guī)模蛋白質(zhì)之間相互作用的研究。在實(shí)際工作中，人們根據(jù)需要發(fā)展了單雜交系統(tǒng)、三雜交系統(tǒng)和反向雜交系統(tǒng)等。

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免疫共沉淀技術(shù)

免疫共沉淀主要是用來(lái)研究蛋白質(zhì)與蛋白質(zhì)相互作用的一種技術(shù)，其基本原理是，在細(xì)胞裂解液中加入抗興趣蛋白的抗體，孵育后再加入與抗體特異結(jié)合的結(jié)合于Pansobin珠上的金黃色葡萄球菌蛋白A(SPA)，若細(xì)胞中有正與興趣蛋白結(jié)合的目的蛋白，就可以形成這樣一種復(fù)合物：“目的蛋白—興趣蛋白—抗興趣蛋白抗體—SPA\|Pansobin”，因?yàn)镾PA\|Pansobin比較大，這樣復(fù)合物在離心時(shí)就被分離出來(lái)。經(jīng)變性聚丙烯酰胺凝膠電泳，復(fù)合物四組分又被分開。然后經(jīng)Western blot法，用抗體檢測(cè)目的蛋白是什么，是否為預(yù)測(cè)蛋白。

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熒光能量轉(zhuǎn)移技術(shù)

熒光共振能量轉(zhuǎn)移廣泛用于研究分子間的距離及其相互作用; 與熒光顯微鏡結(jié)合，可定量獲取有關(guān)生物活體內(nèi)蛋白質(zhì)、脂類、DNA 和RNA 的時(shí)空信息。隨著綠色熒光蛋白的發(fā)展，F(xiàn)RET 熒光顯微鏡有可能實(shí)時(shí)測(cè)量活體細(xì)胞內(nèi)分子的動(dòng)態(tài)性質(zhì)。提出了一種定量測(cè)量FRET效率以及供體與受體間距離的簡(jiǎn)單方法，僅需使用一組濾光片和測(cè)量一個(gè)比值，利用供體和受體的發(fā)射譜消除光譜間的串?dāng)_。該方法簡(jiǎn)單快速，可實(shí)時(shí)定量測(cè)量FRET 的效率和供體與受體間的距離，尤其適用于基于GFP 的供體受體對(duì)。

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噬茵體展示技術(shù)

在編碼噬菌體外殼蛋白基因上連接一單克隆抗體的DNA序列，當(dāng)噬菌體生長(zhǎng)時(shí)，表面就表達(dá)出相應(yīng)的單抗，再將噬菌體過(guò)柱，柱上若含目的蛋白，就會(huì)與相應(yīng)抗體特異性結(jié)合，這被稱為噬菌體展示技術(shù)。此技術(shù)也主要用于研究蛋白質(zhì)之間的相互作用，不僅有高通量及簡(jiǎn)便的特點(diǎn)，還具有直接得到基因、高選擇性的篩選復(fù)雜混合物、在篩選過(guò)程中通過(guò)適當(dāng)改變條件可以直接評(píng)價(jià)相互結(jié)合的特異性等優(yōu)點(diǎn)。

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等離子共振技術(shù)

表面等離子共振技術(shù)已成為蛋白質(zhì)相互作用研究中的新手段。它的原理是利用一種納米級(jí)的薄膜吸附上“誘餌蛋白”，當(dāng)待測(cè)蛋白與誘餌蛋白結(jié)合后，薄膜的共振性質(zhì)會(huì)發(fā)生改變，通過(guò)檢測(cè)便可知這兩種蛋白的結(jié)合情況。SPR技術(shù)的優(yōu)點(diǎn)是不需標(biāo)記物或染料，反應(yīng)過(guò)程可實(shí)時(shí)監(jiān)控。測(cè)定快速且安全，還可用于檢測(cè)蛋白一核酸及其它生物大分子之間的相互作用。

以上就是本次小海星介紹的幾種研究蛋白質(zhì)互作的技術(shù)，希望對(duì)熱愛科研的你有所幫助。