小鼠艾滋病動(dòng)物模型【疾病動(dòng)物模型】

（一）自發(fā)性及轉(zhuǎn)基因動(dòng)物模型

轉(zhuǎn)基因小鼠的出現(xiàn)為HIV動(dòng)物模型的研究開(kāi)辟了新天地，目前主要有4種轉(zhuǎn)基因小鼠用于AIDS研究。

1.tat轉(zhuǎn)基因鼠?將tat基因包括 LTR基因轉(zhuǎn)入小鼠，小鼠出現(xiàn)皮膚瘤，在表皮中能檢出tat 基因；F1子代中，12~18個(gè)月出現(xiàn)紅斑、血管性皮膚瘤(vascular skin tumors)，但這些腫瘤細(xì)胞中并未檢出 tat 基因，這與艾滋病人的卡波濟(jì)肉瘤(Kaposi's sarcoma)切片上未查出 HIV-1一樣。此模型主要用于研究卡波濟(jì)肉瘤的病理。

2.LIR轉(zhuǎn)基因鼠在已建立的4個(gè)LTR/CAT(氯霉素乙?；D(zhuǎn)移酶）轉(zhuǎn)基因鼠的淋巴細(xì)胞、單個(gè)核細(xì)胞中，CAT表達(dá)很低,但在表皮的朗格漢斯細(xì)胞中卻很高。在以 LTR-nef 建立的5個(gè)鼠系中的4個(gè)上發(fā)現(xiàn) nef 基因可在表皮生發(fā)層細(xì)胞中表達(dá)。另外紫外線可加速LTR 在 LTR/LacZ(β-半乳糖苷酶基因),LTR/Luciferase(蟲熒光素酶),LTR-B-galactosi.dase(β-半乳糖苷酶)等轉(zhuǎn)基因鼠的表皮中轉(zhuǎn)錄。本模型對(duì)研究 LTR的作用很有用。

3.nef轉(zhuǎn)基因鼠為了使轉(zhuǎn)人的nef 基因只在T細(xì)胞表達(dá)，設(shè)法使 pNL4-3 克隆病毒株中的nef 基因在鼠CD3增強(qiáng)子/啟動(dòng)子控制之下，發(fā)現(xiàn)該種轉(zhuǎn)基因鼠外周 CD4+細(xì)胞數(shù)量下降,而CD8+細(xì)胞數(shù)不變。Lindemann 等設(shè)法將 HIV-1Bru 的 nef 基因接在鼠 T細(xì)胞受體V38.3的β鏈增強(qiáng)子/啟動(dòng)子控制下游,得到的3個(gè)不同的轉(zhuǎn)基因動(dòng)物鼠系中大多數(shù)動(dòng)物在4～6個(gè)月內(nèi)死亡，并伴有 CD4+細(xì)胞數(shù)的下降、胸腺萎縮、脾大和淋巴結(jié)腫等癥狀，及對(duì)其他病毒的易感性增加。在胸腺萎縮之前，胸腺內(nèi)可測(cè)定到 nef的表達(dá)。

4.病毒全序列轉(zhuǎn)基因鼠1988 年獲得7只病毒全序列轉(zhuǎn)基因鼠(克隆株 pNL4-3)。轉(zhuǎn)基因鼠會(huì)發(fā)生淋巴結(jié)腫,脾大,胸腺萎縮,肺部感染和棘皮癥等病變。從脾臟、淋巴結(jié)、皮膚中可檢出 HIV，但免疫抑制不明顯，未發(fā)現(xiàn)T細(xì)胞感染及數(shù)量降低，其中1只動(dòng)物出現(xiàn)HIV-1 BP120、p65 抗體。F1 代雜合子生長(zhǎng)緩慢，最終在出生后1個(gè)月內(nèi)死亡?？上Т耸笙狄呀?jīng)意外地丟失了。

（二）誘發(fā)性動(dòng)物模型

將女滋病人的臨床標(biāo)本或培養(yǎng)的 HIV懸液感染新生小鼠、大鼠、倉(cāng)鼠、豚鼠均未獲成功。接種HIV的小鼠死亡率升高，病癥為機(jī)會(huì)性感染、腫瘤，部分動(dòng)物出現(xiàn)纖維化脾和淋巴細(xì)胞異常，但在血中查不到 HIV及其抗體。以刀豆蛋白(Con A)激活的小鼠脾細(xì)胞與 HIV 感染的人T細(xì)胞培養(yǎng)的上清液共培養(yǎng)，在IL-2作用下，脾細(xì)胞生長(zhǎng)并形成產(chǎn)病毒的細(xì)胞株，以該細(xì)胞株或人T細(xì)胞產(chǎn)生的HIV靜脈、腹腔接種BALB/c小鼠、Lewis大鼠，小鼠出現(xiàn)細(xì)胞免疫功能異常，抗體、抗原檢測(cè)陽(yáng)性。大鼠則呈一過(guò)性抗體反應(yīng)。

目前在重度聯(lián)合免疫缺陷鼠上移植人體有關(guān)器官和組織建立嵌合體鼠(reconstituted mice）模型取得較滿意的效果。Namikawa等在重度聯(lián)合免疫缺陷小鼠上接種新生兒胸腺、淋巴結(jié)后，直接在胸腺、淋巴結(jié)接種 HIV-1，組織化學(xué)和原位雜交表明病毒能在這些組織內(nèi)復(fù)制。Mosier 等在重度聯(lián)合免疫缺陷鼠血液內(nèi)輸入成人的外周血淋巴細(xì)胞后發(fā)現(xiàn)動(dòng)物能分泌人免疫球蛋白。以純化病毒或感染病毒的人細(xì)胞系接種動(dòng)物,從脾臟、淋巴結(jié)、外周血淋巴細(xì)胞中可檢出病毒，但大多數(shù)小鼠健康，其中15%的小鼠出現(xiàn)消耗性癥狀和血漿內(nèi)腫瘤壞死因子升高的現(xiàn)象，這有助于抗 HIV藥物研究。Kullmann 等在鼠腎囊接種新生兒胸腺、肝組織，在鼠外周血檢測(cè)人T細(xì)胞含量最高可達(dá)6.4%。靜脈接種HIV-1，在胸腺內(nèi)可檢出 HIV-1，且發(fā)現(xiàn)T細(xì)胞從胸腺遷移，引起外周 HIV-1感染。此模型對(duì)研究 HIV-1的母-胎垂直感染有一定意義。

【造模機(jī)制】鼠白血病病毒(murine leukemia virus,MuLV)可以用來(lái)進(jìn)行誘導(dǎo)小鼠免疫缺陷病。例如，具有免疫抑制作用的 Friend MuLV,Raucher MuLV,能夠母嬰傳播，并通過(guò)哺乳傳染 Moloney MuLV,導(dǎo)致免疫缺陷綜合征的 LP-BM5 MuLV,具有嗜神經(jīng)性毒性的Cas-BrE MuLV,以及除導(dǎo)致神經(jīng)性疾病外還能破壞T細(xì)胞，產(chǎn)生嚴(yán)重免疫缺陷的Moloney TS-1 MuLV 毒株。小鼠白血病病毒混合物 LP-BM5 MuLV 誘導(dǎo)小鼠免疫缺陷病機(jī)制不甚清楚。有人認(rèn)為可能是普遍的多克隆淋巴細(xì)胞增生活化搶先抑制了特異性的免疫反應(yīng)作用，從而導(dǎo)致免疫缺陷的形成。

【造模方法】選用新生BALB/c小鼠。儀器藥品：酶標(biāo)儀、熒光顯微鏡、小鼠白血病病毒LP-BM5 MuLV懸液等。模型制作：隨機(jī)選取新生 BALB/c小鼠20只，分別腹腔接種小鼠白血病病毒 LP-BM5 MuLV懸液,0.5ml/只，病毒滴度為3×10'pfu/ml。同時(shí)，取相同小鼠20只作正常對(duì)照，腹腔注射等量的生理鹽水。逐日觀察小鼠發(fā)病情況，于接種病毒后 1個(gè)月時(shí)殺死小鼠，5只/組，測(cè)定血中免疫球蛋白的含量；于接種病毒后4個(gè)月時(shí)再殺死小鼠,5只/組,測(cè)定淋巴結(jié)的體積、T 淋巴細(xì)胞亞群和淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化能力的變化；并繼續(xù)觀察剩余小鼠（≤10只/組）的生存情況。

模型檢測(cè)：

1.小鼠血清中免疫球蛋白的檢測(cè)用 ELISA法檢測(cè)。

2.小鼠T淋巴細(xì)胞亞群的檢測(cè)用間接免疫熒光法檢測(cè)。

3.小鼠淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)用H3-TdR法進(jìn)行。

【模型特點(diǎn)】新生 BALB/c 小鼠腹腔接種 LP-BM5 MuLV,1個(gè)月后小鼠血中免疫球蛋白明顯增高，4個(gè)月后小鼠出現(xiàn)頜下淋巴結(jié)明顯腫大，B細(xì)胞多克隆活化，Th(CD4+)細(xì)胞數(shù)明顯減少（占T細(xì)胞總數(shù)的30%），而Ts(CD8+）細(xì)胞數(shù)量不變，小鼠脾細(xì)胞懸液對(duì)ConA和Lps 刺激后的淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化功能明顯降低。并出現(xiàn)淋巴結(jié)病、脾大、B細(xì)胞和T細(xì)胞的深度免疫功能缺陷、B淋巴細(xì)胞瘤以及對(duì)其他病原體感染的敏感性增高等類似人類艾滋病的臨床表現(xiàn)。

【注意事項(xiàng)】不同的鼠白血病病毒毒株感染小鼠后引起不同的疾病表現(xiàn)，應(yīng)根據(jù)研究目的來(lái)選用合適的毒株感染小鼠，方可復(fù)制出理想的動(dòng)物模型。

【應(yīng)用范圍】小鼠的AIDS的模型有許多優(yōu)點(diǎn)，包括對(duì) AIDS早期有較準(zhǔn)確的反映，遺傳學(xué)相同的純種動(dòng)物有更確切了解的免疫學(xué)參數(shù)，并可能在相對(duì)短的時(shí)間內(nèi)，在大量小鼠中再引起疾病，可用于抗艾滋病藥物的初篩，故有很大的應(yīng)用前景。

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