對于大多數(shù)流式細(xì)胞儀的用戶來說，F(xiàn)lowJo這個軟件是既熟悉又陌生。眾所周知，F(xiàn)lowJo是處理FCS格式數(shù)據(jù)最好的幫手，但是要怎樣運(yùn)用該軟件得到漂亮的數(shù)據(jù)呢？接下來我就以血液樣本為例，為大家簡單介紹最新版的FlowJo?10.7.2基礎(chǔ)操作。

1.數(shù)據(jù)導(dǎo)入

打開軟件以后點擊“Add?Samples...”選擇你需要處理的數(shù)據(jù)導(dǎo)入其中即可，當(dāng)然也可以簡單粗暴的直接把單個數(shù)據(jù)或者文件夾直接拖拽到軟件里，這兩種途徑的目的與結(jié)果都是相同的，隨意選擇。

2.橫縱坐標(biāo)調(diào)節(jié)雙擊第一數(shù)據(jù)，得到FSC-SSC圖，點擊“T”選擇“Customize?Axis...”修改“Scale”里“Linear”的數(shù)字大小即可改變圖形坐標(biāo)，縱坐標(biāo)同理可得。

3.畫門分析數(shù)據(jù)在FSC-SSC的窗口里選擇適合你的任意一種形狀的門，我這里是選擇用橢圓形圈出淋巴細(xì)胞群。接著點擊下一級“綠色三角”按鈕，進(jìn)入下一步窗口的調(diào)節(jié)。進(jìn)入下一級后，首先要做的是點擊橫眾坐標(biāo)的“黑色三角”按鈕，選擇對應(yīng)參數(shù)（我這里選擇了CD3+）。其次點擊“T”修改“Scale”里“Biex”的數(shù)字大小即可改變圖形橫眾坐標(biāo)坐標(biāo)，得到漂亮的圖形。以此類推，可以一直分級畫下去，同一級里也可以畫多個獨立的門。

此時，你可能會說如果我只是單色怎么辦？單色不但可以畫門，還可以做出漂亮的疊圖

圖4

如圖4將FSC-SSC窗口的下一級的橫坐標(biāo)依然調(diào)成“CD3+”，但是橫坐標(biāo)選擇“Histogram”，接著上面那欄選擇單/雙門。選中圖片后點擊鼠標(biāo)右鍵，選擇“Copy?to?Layout?Editor”即可將圖片導(dǎo)入“Layout?Editor”或者直接拖拽過去也行。

圖5

當(dāng)所有圖片都到“Layout?Editor”里時，來回拖拽每一張圖片使它們自動重疊（如圖5）；

圖6

選中圖片后單擊鼠標(biāo)右鍵找到“Histogram”，里面有四種不同排列的方式（如圖6），選擇你最喜歡的一種即可。

4.單個數(shù)據(jù)的門應(yīng)用到全部數(shù)據(jù)如圖選中第一個數(shù)據(jù)所有窗口，用鼠標(biāo)將其拖拽到上方的“All?Samples”就可將其應(yīng)用到所有數(shù)據(jù)，然后根據(jù)實際情況調(diào)整每個樣品的門。

5.保存數(shù)據(jù)當(dāng)數(shù)據(jù)處理好了之后，最重要的是保存，不然你就能感受到什么叫揪心的痛，哈哈哈！保存有多種方式，其中最主要的是先保存“Workspase”。只有保存了“Workspase”，你的工作才算沒有白做，后期想怎么再修改都可以。如圖在“File”窗口點擊“Save?As...”里的“Save?As?Workspase?(WSP)”，即可保存Workspase。與Workspase同樣重要的是“Save?As...”里的“Export?as?Template”，這是保存數(shù)據(jù)模板的路徑，它可以讓我們的工作事半功倍。下次處理同樣的數(shù)據(jù)直接“Open”模板導(dǎo)入需要處理的數(shù)據(jù)即可，不用再浪費時間其重復(fù)同樣的工作了。