實(shí)驗(yàn)三 影響紅細(xì)胞滲透脆性及血液凝固的因素
一、影響紅細(xì)胞滲透脆性的因素
【實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹?br>1、本實(shí)驗(yàn)學(xué)習(xí)測(cè)定紅細(xì)胞滲透脆性的方法。
2、加深對(duì)細(xì)胞外液滲透張力在維持紅細(xì)胞正常形態(tài)與功能重要性方面的理解。
3、觀察不同因素對(duì)紅細(xì)胞滲透脆性的影響。
【實(shí)驗(yàn)原理】
將紅細(xì)胞懸浮于等滲NaCI液中，其形態(tài)不變。若置于低滲NaCI溶液中則發(fā)生膨脹破裂，此現(xiàn)象稱為紅細(xì)胞滲透脆性。但紅細(xì)胞對(duì)低滲鹽溶液具有一定抵抗力，其大小可用NaCI溶液濃度的高低來表示。將血液滴入不同濃度的低滲NaCI溶液中，開始出現(xiàn)溶血現(xiàn)象的NaCI溶液濃度為該血液紅細(xì)胞的最小抵抗力（正常為0.42-0.46%NaCI溶液）。出現(xiàn)完全溶血現(xiàn)象時(shí)的NaCI溶液濃度為該紅細(xì)胞的最大抵抗力（正常為0.28-0.32%NaCI溶液）。前者代表紅細(xì)胞的最大脆性（最小抵抗力），后者代表紅細(xì)胞最小脆性（最大抵抗力）。生理學(xué)上將能使懸浮于其中的藥細(xì)胞保持正常形態(tài)的溶液稱為等張溶液，不能跨過細(xì)胞膜的微粒所形成的力，但等滲溶液并不一定是等張溶液（如1.9%的尿素溶液）。
【材料與方法】
一、實(shí)驗(yàn)對(duì)象 家兔
二、器械藥品：試管架、小試管45支、載玻片、蓋玻片注射器、8號(hào)注射針頭、棉簽，1%NaCI溶液、0.85%氯化鈉溶液、蒸餾水，1.9%尿素溶液、地塞米松、皂甙。
三、方法與步驟
（一）配制不同濃度的低滲NaCI溶液 取口徑相同的干潔小試管36支，分別編號(hào)排列在三個(gè)試管架上，按下表分別向各試管內(nèi)加入1%NaCI溶液和蒸餾水混勻，配制從0.68-0.24%12種不同濃度的NaCI低滲溶液，每管總量均為2.5ml。

表7-1 不同濃度低滲氯化鈉溶液的配制

試劑??試管編號(hào)
??1??2??3??4??5??6??7??8??9??10??11??12
1%NaCl(ml)??1.7??1.6??1.5??1.4??1.3??1.2??1.1??1.0??0.9??0.8??0.7??0.6
蒸溜水（ml）??0.8??0.9??1.0??1.1??1.2??1.3??1.4??1.5??1.6??1.7??1.8??1.9
NaCl濃度%??0.68??0.64??0.60??0.56??0.52??0.48??0.44??0.40??0.36??0.32??0.28??0.24
實(shí)驗(yàn)結(jié)果????????????????????????
皂甙（ml）????????????????????????
另取9支小試管，在三個(gè)試管架中分別編號(hào)13-15，分別加入0.85%NaCI溶液、1.9%尿素和蒸溜水2.5ml。
（二）采集標(biāo)本 家兔麻醉后，仰臥固定于兔手術(shù)臺(tái)上，分離一側(cè)頸總動(dòng)脈或股動(dòng)脈插管備放血用（具體方法參見第 章）。依次向15支試管內(nèi)各加1滴，輕輕顛倒混均，切忌用力振蕩。先觀察13、14、15管的變化，其他12管在室溫下放置1小時(shí)。
【觀察指標(biāo)】
血液溶血情況，其現(xiàn)象可分為以下幾種：
1、試管內(nèi)液體完全變成透明紅色，說明紅細(xì)胞完全破裂，稱為完全溶血。
2、試管內(nèi)液體下層為混濁紅色，上層無色透明，表示部分紅細(xì)胞沒有破壞，稱為不完全深血。
3、試管內(nèi)液體下層為混濁紅色，上層無色透明，說明紅細(xì)胞完全沒有破壞。
【觀察項(xiàng)目】
1、觀察不同濃度低滲NaCI 混合液的顏色和透明度。
2、比較第一個(gè)試管架第13、14、15管的溶血情況及第二、第三個(gè)試管架中與第一個(gè)試管架中對(duì)應(yīng)試管的溶血情況并分析其原因。
【注意事項(xiàng)】
1、每支試管內(nèi)血液滴入量應(yīng)準(zhǔn)確無誤（只加一滴）。
2、確保每支試管NaCI溶液的濃度、容量一致。
3、小試管必須清潔、干燥。
4、觀察結(jié)果時(shí)應(yīng)以白色為背景。
【要求與思考】
1、實(shí)驗(yàn)前要預(yù)習(xí)《機(jī)能實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)》與本實(shí)驗(yàn)有關(guān)的內(nèi)容。
2、復(fù)習(xí)和掌握生理學(xué)教材有關(guān)血液、滲透壓的概念以及紅細(xì)胞的形態(tài)、可塑變形性等基本知識(shí)。
3、要掌握等滲、等張、最大脆性、最小脆性、最大抵抗力和最小抵抗力等基本概念。
【作業(yè)題】
1、為什么紅細(xì)胞在等滲的尿素溶液中迅速發(fā)生溶血？
2、測(cè)定紅細(xì)胞滲透脆性有何臨床意義？
3、同一個(gè)體的紅細(xì)胞的滲透脆性不一樣，為什么？

二、影響血液凝固的因素
【實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹?br>本實(shí)驗(yàn)以發(fā)生血液凝固的時(shí)間為指標(biāo)，向血液中加入或去掉某些因素或改變某些條件（如溫度等），以觀察對(duì)血液凝固的影響。
【實(shí)驗(yàn)原理】 血液流出血管后很快就會(huì)凝固。血液凝固分為內(nèi)源性凝血系統(tǒng)與外源性凝血系統(tǒng)是指在組織因子的參與下血液凝固的過程。本實(shí)驗(yàn)直接從動(dòng)物動(dòng)脈放血，由于血液幾乎沒有和組織因子接觸，其凝血過程主要由內(nèi)源性凝血系統(tǒng)所發(fā)動(dòng)。血液凝固受許多因素的影響，凝血因子可直接影響血液凝固過程。溫度、接觸面的光滑程度等也可影響血液凝固過程。
【材料與方法】
一、實(shí)驗(yàn)對(duì)象 家兔
二、器材藥品 小燒杯、帶橡皮刷的玻棒或竹簽（或小號(hào)試管刷）、清潔試管10支、秒表、水浴裝置一套、冰塊、棉花、石蠟油、肝素或草酸鉀、生理鹽水。
三、方法與步驟
（一）動(dòng)物準(zhǔn)備 家兔麻醉后，仰臥固定于兔手術(shù)臺(tái)上，行一側(cè)頸總動(dòng)脈或股動(dòng)脈插管，備取血用。
（二）試管的準(zhǔn)備 取8支干凈的小試管，按表7-2準(zhǔn)備各種不同的實(shí)驗(yàn)條件。
表7-2 影響血液凝固的因素
實(shí) 驗(yàn) 項(xiàng) 目??實(shí)驗(yàn)結(jié)果（凝血時(shí)間）
不加其它物質(zhì)
放棉花少許
用石蠟油潤(rùn)滑試管內(nèi)表面
保溫于37?C水浴糟中
冰水中
加肝素8單位
加草酸鉀1-2mg
肺組織浸液1ml

（三）觀察指標(biāo) 凝血時(shí)間
【觀察項(xiàng)目】
1、取兔動(dòng)脈血10ml，注入兩個(gè)小燒杯內(nèi)，一杯靜置，另一杯用帶有橡皮刷的玻棒或竹簽（也可用小號(hào)試管刷）輕輕攪拌，數(shù)分鐘后，玻棒或竹簽上結(jié)成紅色血團(tuán)。用水沖洗，觀察纖維蛋白形狀。然后比較兩杯的凝血情況。
2、準(zhǔn)備好的每支試管中滴入兔血1ml，觀察血液是否發(fā)生凝固及發(fā)生凝固的時(shí)間。
【注意事項(xiàng)】
1、加強(qiáng)分工合作，記時(shí)須及時(shí)、準(zhǔn)確。最好由一位同學(xué)負(fù)責(zé)將血液加入試管，其它同學(xué)各掌握1-2支試管，每隔半分鐘觀察一次。
2、試管、注射器及小燒杯必須清潔、干燥。
3、每支試管加入的血液量要力求一致。
【要求與思考】
1、復(fù)習(xí)生理學(xué)教科書有關(guān)血液凝固的基本理論知識(shí)。
2、弄清楚血液凝固對(duì)機(jī)體的利弊關(guān)系。
3、試分析在本實(shí)驗(yàn)中有可能哪些因素影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果？如何克服這些因素？
【作業(yè)題】
1、肝素和草酸鉀皆能抗凝，其機(jī)理一樣嗎？為什么？
2、如何加速或延緩血液凝固？試闡明機(jī)理。
3、分析上述各因素影響凝固時(shí)間的機(jī)制。
4、 正常人體內(nèi)血液為什么不發(fā)生凝固？

5、 如何認(rèn)識(shí)纖維蛋白原在凝血過程中的作用？

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