在生命科學(xué)領(lǐng)域中，不管是生物醫(yī)藥還是基礎(chǔ)科研，研究人員長(zhǎng)期以來(lái)使用抗體追蹤感興趣的蛋白質(zhì)，因?yàn)樗鼈兡芘c特定靶標(biāo)結(jié)合。

好的抗體是如何生產(chǎn)制備的呢？如果把抗體開(kāi)發(fā)與重組蛋白表達(dá)類比：抗原便相當(dāng)于表達(dá)載體，免疫動(dòng)物就是表達(dá)宿主，而開(kāi)發(fā)平臺(tái)便是生產(chǎn)抗體的一個(gè)工具，通過(guò)對(duì)它們進(jìn)行整合，開(kāi)發(fā)生產(chǎn)出識(shí)別特定靶點(diǎn)、滿足特定應(yīng)用場(chǎng)景的抗體。

?之前我們討論了免疫動(dòng)物對(duì)抗體開(kāi)發(fā)的影響（抗體開(kāi)發(fā)之物種選擇）抗體開(kāi)發(fā)平臺(tái)的差異（抗體開(kāi)發(fā)之平臺(tái)選擇），而作為抗體開(kāi)發(fā)的第一步-免疫原準(zhǔn)備，雖然尤為重要但總是讓人忽略，很多時(shí)候在早期抗原設(shè)計(jì)上就已經(jīng)決定了抗體開(kāi)發(fā)的最終成敗。而在抗原準(zhǔn)備上需要回答以下問(wèn)題：

• 抗原類型選擇

• 抗原制備方式

  
  

抗原類型選擇

抗原類型大致可以分為：細(xì)胞、多肽、蛋白、基因。兼顧開(kāi)發(fā)成本和難度上進(jìn)行決定：

細(xì)胞：靶點(diǎn)不明確，或蛋白重組表達(dá)難度大，需先篩選過(guò)表達(dá)細(xì)胞系。
多肽：在兼顧免疫原性的同時(shí)結(jié)合內(nèi)源線性表位結(jié)構(gòu)，保障WB線性表位驗(yàn)證的同時(shí)可以兼顧C(jī)HIP、IF或者其他復(fù)雜應(yīng)用。

蛋白：免疫原位點(diǎn)多，成功幾率高。針對(duì)結(jié)構(gòu)復(fù)雜蛋白，常常采用重組表達(dá)后進(jìn)行免疫原制備，盡可能地保障后續(xù)能夠識(shí)別天然結(jié)構(gòu)的IF、FC等應(yīng)用場(chǎng)景；

基因：免疫技術(shù)難度和失敗風(fēng)險(xiǎn)較高，一般搭配其他免疫類型共免疫。

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抗原制備方式

對(duì)于細(xì)胞、多肽、基因免疫原，拋開(kāi)方案設(shè)計(jì)，在制備中都是比較單一，而重組蛋白在制備中兼顧的因素會(huì)更多一些，涉及到了重組表達(dá)區(qū)段，表達(dá)載體，表達(dá)宿主等選擇，這需要更為綜合的評(píng)估。

重組表達(dá)區(qū)段：結(jié)合后期抗體應(yīng)用，以及內(nèi)源蛋白自身特性、結(jié)構(gòu)等因素決定目的表達(dá)片段的取舍。

表達(dá)宿主：制備抗體的應(yīng)用要求越高，對(duì)于免疫原蛋白制備要求越需要近似于內(nèi)源蛋白的結(jié)構(gòu)和修飾，這樣才能保證外源重組蛋白免疫原造成的偏差越小。一般在原核大腸桿菌和真核哺乳細(xì)胞表達(dá)宿主之間進(jìn)行取舍。
表達(dá)載體：在確定表達(dá)宿主基礎(chǔ)上，基于標(biāo)簽、信號(hào)肽、啟動(dòng)子等多方考量設(shè)計(jì)。

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匯總

綜合考慮多數(shù)采用多肽和重組蛋白作為抗原類型，在選擇重組蛋白免疫原基礎(chǔ)上，滿足常規(guī)抗體應(yīng)用需求（WB、CHIP、IF等）情況下可選擇原核大腸桿菌進(jìn)行制備重組蛋白，后續(xù)開(kāi)發(fā)常為多克隆抗體。對(duì)于高質(zhì)量單克隆抗體的制備上，盡量選擇真核哺乳表達(dá)的重組蛋白抗原。

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