一、實驗?zāi)康?/p>

? ? ? ?蛙類的某些基本生命活動和生理功能與哺乳類動物有相似之處，而且其離體組織的生活條件比較簡單，易于控制和掌握，來源也較豐富，由此在生理學(xué)實驗，尤其是細胞生理學(xué)的某些實驗中，常用蛙或蟾蜍的坐骨神經(jīng)腓腸肌標本來觀察神經(jīng)肌肉的興奮性、刺激與反應(yīng)的規(guī)律及肌肉收縮的特點等。制備具有正常興奮收縮功能的蛙類坐骨神經(jīng)腓腸肌標本是生理學(xué)實驗的基本操作技術(shù)之一。

二、實驗材料

蟾蜍或蛙；蛙板、探針、粗剪刀、細剪刀、尖鑷子、玻璃分針、大頭針、培養(yǎng)皿、滴管、 瓷碗、鋅銅弓或鋁銀電極、任氏液。

三、實驗步驟

1．毀腦脊髓??

? ? ? ? ? ?取蟾蜍一只，用左手握住，以示指壓其頭部前端使其盡量前俯，右手持探針自枕骨大孔處垂直刺入，到達椎管，即將探針改變方向刺入顱腔，向各側(cè)不斷攪動，徹底搗毀腦組織；再將探針原路退出，刺向尾側(cè)，捻動探針使逐漸刺入整個椎管內(nèi)，搗毀脊髓。此時蟾蜍下頜呼吸運動應(yīng)消失，四肢松軟，即成為一毀腦脊髓的蟾蜍（pithed toad）。否則須按上法再行搗毀。

2．剪除軀干上部及內(nèi)臟? 用粗剪刀在顱骨后方剪斷脊柱。左手握住蟾蜍脊柱，右手將粗剪刀沿兩側(cè)（避開坐骨神經(jīng)）剪開腹壁。此時軀干上部及內(nèi)臟即全部下垂。剪除全部軀干上部及內(nèi)臟組織。

3．剝皮? 避開神經(jīng)，用左手持圓頭鑷子夾住脊柱，右手捏住皮膚邊緣，逐步向下牽拉剝離皮膚。拉至大腿時，如阻力較大，可先剝下一側(cè)，再剝另一側(cè)。將全部皮膚剝除后，將標本置于盛有任氏液的培養(yǎng)皿中。

4、分離兩腿：避開坐骨神經(jīng)，用粗剪刀從背側(cè)剪去骶骨，然后沿中線將脊柱剪成左右兩半，再從恥骨聯(lián)合中央剪開（為保證兩側(cè)坐骨神經(jīng)完整，應(yīng)避免剪時偏向一側(cè)）。將已分離的標本浸入盛有任氏液的培養(yǎng)皿中。

5、游離坐骨神經(jīng)：取腿一條，先用玻璃分針沿脊柱側(cè)游離坐骨神經(jīng)腹腔部，然后用大頭針將標本背位固定于干凈蛙板上。再用玻璃分針循股二頭肌和半膜肌之間的坐骨神經(jīng)溝，縱向分離暴露坐骨神經(jīng)之大腿部分，直至分離至腘窩脛神經(jīng)分叉處。然后剪斷股二頭肌腱、半腱肌和半膜肌肌腱，并繞至前方剪斷股四頭肌腱。自上向下剪斷所有坐骨神經(jīng)分支。將連著3～4節(jié)椎骨的坐骨神經(jīng)分離出來。

6、完成坐骨神經(jīng)腓腸肌標本：將已游離的坐骨神經(jīng)搭在腓腸肌上。用粗剪刀自膝關(guān)節(jié)周圍向上剪除并刮凈所有大腿肌肉，在距膝關(guān)節(jié)約1cm處剪斷股骨。棄去上段股骨，保留部分即為坐骨神經(jīng)腓腸肌標本