今天瑞禧生物小編給大家分享的是miR-486-3p/miR-7/IGF1R/miR-130a/miR--664--5p/miR-342-5p修飾外泌體的制備研究方法，和小編一起來看看吧！

旨在進(jìn)一步探索血管生成的機(jī)制，證實外泌體中富集miR-130a，并轉(zhuǎn)運進(jìn)入血管內(nèi)皮細(xì)胞中靶向c-MYB，從而促進(jìn)血管生成。以期抗血管治療提供新的靶點，進(jìn)展提供潛在的新的生物學(xué)檢測指標(biāo)。

研究內(nèi)容及方法:

細(xì)胞水平:

收集SGC7901細(xì)胞培養(yǎng)液，多步差速離心提取外泌體，并于電鏡下觀察其形

態(tài)，Western blot檢測其特異性分子標(biāo)志;

生物信息學(xué)分析及熒光素酶報告基因驗證miR-130a對c-MYB靶向作用。培養(yǎng)SGC7901，通過轉(zhuǎn)染使其降表達(dá) miR-130a，并獲得相應(yīng)miR-130a低表達(dá)的外泌體，不同miR-130a含量的外泌體與HUVEC細(xì)胞共培養(yǎng)后，進(jìn)行HUVEC 細(xì)胞功能學(xué)實驗;Western blot及 RT-qPCR分別檢測c-MYB 與miR-130a含量變化。

直接改變HUVEC 細(xì)胞中 miR-130a含量，采用lipo-2000商業(yè)化轉(zhuǎn)染試劑直

接轉(zhuǎn)染血管內(nèi)皮細(xì)胞使其過/降表達(dá) miR-130a,再進(jìn)行血管細(xì)胞功能學(xué)試驗;Western blot及 RT-qPCR分別檢測細(xì)胞內(nèi)c-MYB 與 miR-130a含量變化。

3、動物實驗水平

過/降表達(dá) miR-130a荷瘤小鼠模型建立:感染SGC7901細(xì)胞系獲得sGC7901-miR-130a過/降表達(dá)細(xì)胞系，裸鼠皮下接種植瘤;

荷瘤小鼠成瘤期間監(jiān)測:監(jiān)測小鼠大小的變化，驗證 miR-130a過表達(dá)荷

瘤小鼠生長迅速。

監(jiān)測小鼠中分子指標(biāo)變化:外泌體抽提試劑盒提取小鼠血清外泌體，RT-

PCR驗證各組中 miR-130a變化;檢測小鼠移植瘤組織 miR-130a 及 c-MYB表達(dá)，免疫組織化學(xué)染色CD31，用于檢測各組移植瘤中血管生成情況。

相關(guān)產(chǎn)品：

近紅外熒光cy3標(biāo)記外泌體

AIE熒光分子標(biāo)記外泌體

近紅外熒光iRFP682蛋白標(biāo)記外泌體

近紅外熒光CD63蛋白標(biāo)記外泌體

外泌體包裹紅色熒光(FMDV-VP3)

FITC標(biāo)記外泌體

TRITC標(biāo)記外泌體

CY3標(biāo)記外泌體

CY3.5標(biāo)記外泌體

CY5標(biāo)記外泌體

CY5.5標(biāo)記外泌體

CY7標(biāo)記外泌體

CY7.5標(biāo)記外泌體

RXYWX.2022.4.26