導(dǎo)讀

? 蛋白質(zhì)乙酰化修飾定義

? 蛋白質(zhì)乙?；揎椆δ?/p>

? 組蛋白乙?；{(diào)控過程

? 蛋白質(zhì)乙酰化修飾位點(diǎn)鑒定流程

? 蛋白質(zhì)乙?；揎椊M學(xué)定量分析流程

蛋白質(zhì)在細(xì)胞中經(jīng)過翻譯后，到被運(yùn)輸?shù)较鄳?yīng)的細(xì)胞器并且發(fā)生特定的生物學(xué)作用前會經(jīng)過很重要的一步加工，那就是蛋白質(zhì)翻譯后修飾加工。蛋白質(zhì)翻譯后修飾的作用主要是改變蛋白質(zhì)的活性、定位或功能。通過蛋白質(zhì)翻譯后修飾也進(jìn)一步增加了細(xì)胞通路機(jī)制和生命活動的多樣性和復(fù)雜性。常見的蛋白質(zhì)翻譯后修飾包括磷酸化，乙?；?，糖基化，泛素化等。在這期我們就先來說說乙?；?。

蛋白質(zhì)乙?；揎?/p>

蛋白質(zhì)乙酰化修飾，顧名思義指的就是在蛋白質(zhì)原有基礎(chǔ)上面嫁接上乙酰化基團(tuán)。在細(xì)胞中，乙?；揎椀姆磻?yīng)由乙酰基轉(zhuǎn)移酶所催化，將乙酰輔酶A的乙?；D(zhuǎn)移并添加在蛋白質(zhì)賴氨酸殘基上。在早期的研究中，乙?；揎椧恢北徽J(rèn)為是真核細(xì)胞所特有的一種翻譯后修飾，直到后來研究發(fā)現(xiàn)原核細(xì)胞中年也存在著蛋白質(zhì)乙?；揎?。所以，乙?；揎検窃撕驼婧松锼灿械囊环N翻譯后修飾類型。

蛋白質(zhì)乙?；揎椀墓δ?/p>

目前對乙?；揎椀墓δ苎芯恐饕性趯?xì)胞轉(zhuǎn)錄調(diào)控，以及對代謝通路的調(diào)控這兩個方面。在眾多乙?；揎椀牡鞍踪|(zhì)中，研究較多的要數(shù)細(xì)胞核中包圍DNA的組蛋白了。組蛋白和DNA纏繞構(gòu)成核小體，組蛋白的甲基化、乙酰化修飾能夠調(diào)節(jié)DNA纏繞的松緊度，從而對基因表達(dá)進(jìn)行調(diào)控，因此，組蛋白的翻譯后修飾是表觀遺傳學(xué)研究中的重要一環(huán)。另外，研究也發(fā)現(xiàn)乙?；揎椘毡榇嬖谟谌说亩喾N代謝酶之中，并且參與調(diào)控代謝通路以及代謝酶的活性。其中在肝臟這樣的代謝器官中就存在著多種代謝酶被高度乙?；?。因此，對蛋白質(zhì)新的乙酰化位點(diǎn)的研究以及乙?；揎椊M學(xué)研究能夠為揭示更多病癥的原因提供重要指導(dǎo)意義，并未疾病相關(guān)的新藥研發(fā)打開新思路。

組蛋白乙?；{(diào)控過程

在細(xì)胞核內(nèi)，組蛋白乙?；c組蛋白去乙?；^程處于動態(tài)平衡，組蛋白的乙?；接山M蛋白乙?；D(zhuǎn)移酶（histone acetyltransferase, HAT）和組蛋白去乙酰化酶（histone deacetylase, HDAC）共同調(diào)控。HAT將乙酰輔酶A的乙酰基轉(zhuǎn)移到組蛋白氨基末端特定的賴氨酸殘基上，組蛋白在帶上負(fù)電乙?；鶊F(tuán)后，與同樣帶負(fù)電的DNA相互排斥，因此DNA纏繞變得松弛，能夠與轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合開啟基因的表達(dá)。相反HDAC使組蛋白去乙?；龠M(jìn)帶負(fù)電荷的DNA緊密結(jié)合，核小體包裹得更為緊密，DNA無法與轉(zhuǎn)錄因子相結(jié)合，基因的轉(zhuǎn)錄也就相應(yīng)地受到抑制。

蛋白質(zhì)乙酰化鑒定

蛋白質(zhì)乙?；b定流程

1. 組織/細(xì)胞破碎，提取、提純目的蛋白質(zhì)

2. 使用胰蛋白酶將目的蛋白酶解成多肽片段

3. 使用高效特異性乙酰化抗體對乙?；揎楇亩芜M(jìn)行免疫富集

4. 使用LC-MS/MS對富集的乙酰化肽段進(jìn)行鑒定分析

5. 數(shù)據(jù)分析，并對鑒定的乙酰化位點(diǎn)的生物學(xué)功能進(jìn)行解釋預(yù)測。

隨著蛋白質(zhì)組研究的發(fā)展，我們越來越深刻地意識到，對于生物體生命活動的管理和調(diào)控過程，密切相關(guān)的不僅是單個蛋白質(zhì)層面的修飾狀態(tài)，更重要的是研究蛋白質(zhì)組學(xué)水平研究在翻譯后修飾的動態(tài)變化。高質(zhì)、高效的蛋白質(zhì)翻譯后修飾富集技術(shù)和豐富的、精準(zhǔn)的定量手段使得研究蛋白質(zhì)水平的翻譯后修飾組學(xué)成為現(xiàn)實(shí)，借助這些組學(xué)研究手段能夠?qū)崿F(xiàn)不同生理病理狀態(tài)下生物樣本在翻譯后修飾水平上的定量比較，深入地揭示翻譯后修飾水平的波動與生物生命活動的密切聯(lián)系。

除了以上對單個蛋白質(zhì)的乙?；癁槲稽c(diǎn)進(jìn)行分析，我們還可以通過結(jié)合iTRAQ，SILAC定量蛋白組學(xué)標(biāo)記，實(shí)現(xiàn)對乙?；揎椊M學(xué)進(jìn)行定量分析，研究比對兩個生物樣品中的各個蛋白的乙?；剑瑸榘l(fā)現(xiàn)新的乙?；悬c(diǎn)和蛋白生物靶標(biāo)提供有力支持。

蛋白質(zhì)乙酰化修飾組學(xué)定量分析

蛋白質(zhì)乙?；揎椊M學(xué)定量分析流程

1. SILAC細(xì)胞標(biāo)記，組織/細(xì)胞破碎，提取、提純目的蛋白質(zhì)（基于SILAC的乙酰化修飾組學(xué)定量）

2. 使用胰蛋白酶將目的蛋白酶解成多肽片段

3. 對多肽片段進(jìn)行iTRAQ標(biāo)記（基于iTRAQ的乙?；揎椊M學(xué)定量）

4. 使用高效特異性乙?；贵w對乙?；揎楇亩芜M(jìn)行免疫富集

5. 使用LC-MS/MS對富集的乙酰化肽段進(jìn)行序列分析

6. 數(shù)據(jù)分析，比對不同樣本中蛋白乙?；揎椝讲町?，并對產(chǎn)生變化的生物學(xué)意義進(jìn)行解釋。