DSP（Lomant 試劑）是水不溶性、同型雙功能 N-羥基琥珀酰亞胺酯（NHS 酯）交聯(lián)劑，具有硫醇可切割性、伯胺反應(yīng)性，適用于多種應(yīng)用。DSP 在8個(gè)碳原子間隔臂的每端有一個(gè)胺反應(yīng)性 NHS 酯。NHS 酯在 pH 值 7–9 的條件下與伯胺反應(yīng)可形成穩(wěn)定的酰胺鍵，并釋放 N-羥基琥珀酰亞胺。蛋白（包括抗體）通常在賴氨酸 (K) 殘基的側(cè)鏈和每個(gè)多肽的 N 端有若干伯胺，這些伯胺可用作 NHS 酯交聯(lián)試劑的靶標(biāo)。DSP 是非磺化的且不溶解在水中，因此必須首先溶解在有機(jī)溶劑中，然后再添加到水反應(yīng)混合物中。由于 DSP 不具有帶電的基團(tuán)，它具有親脂性和膜可穿透性，因此可用于細(xì)胞內(nèi)和膜內(nèi)偶聯(lián)。DSP (DTTSP) 的磺化類似物具有水溶性。如果相關(guān)的應(yīng)用需要一個(gè)在還原劑條件下不能裂解的穩(wěn)定間隔臂，也可使用 DSP 交聯(lián)劑的不可切割類似物 DSS。

圖1.DSP結(jié)構(gòu)式

DSP 在8個(gè)碳原子間隔臂的每端有一個(gè)胺反應(yīng)性 N-羥基琥珀酰亞胺 (NHS) 酯。NHS 酯在 pH 值 7-9 的條件下與伯胺反應(yīng)可形成穩(wěn)定的酰胺鍵，同時(shí)釋放 N-羥基琥珀酰亞胺離去基團(tuán)。蛋白（包括抗體）通常在賴氨酸 (K) 殘基的側(cè)鏈和每個(gè)多肽的 N 端有若干伯胺，這些伯胺可用作 NHS 酯交聯(lián)試劑的靶標(biāo)。如果相關(guān)的應(yīng)用需要一個(gè)在還原劑條件下不能裂解的穩(wěn)定間隔臂，也可使用 DSP 交聯(lián)劑的不可切割類似物 DSS。

Lomant 試劑的特點(diǎn)：
?反應(yīng)性基團(tuán)：NHS 酯（兩端）
? 可與以下基團(tuán)發(fā)生反應(yīng)：氨基基團(tuán)（伯胺）
? 胺反應(yīng)性 NHS 酯與任何含伯胺分子迅速反應(yīng)
? pH 值為8.5時(shí)，間隔臂中的二硫鍵易被 10-50 mM DTT 或 TCEP 切割
? 間隔臂也可被還原 SDS-PAGE 上樣緩沖液切割
? 可切割交聯(lián)劑能夠分離交聯(lián)產(chǎn)物
? 不溶于水（首先溶于 DMF 或 DMSO）；與 DTSSP (Sulfo-DSP) 具有可比性
? 可穿透膜，可用于細(xì)胞內(nèi)交聯(lián)

應(yīng)用：
? 細(xì)胞裂解和免疫沉淀前細(xì)胞內(nèi)蛋白的化學(xué)交聯(lián)
? “固定”蛋白相互作用，以便識(shí)別較弱或瞬時(shí)蛋白相互作用
? 固定組織進(jìn)行免疫染色而不損壞 RNA
? 進(jìn)行蛋白交聯(lián)，以通過單步反應(yīng)產(chǎn)生生物偶聯(lián)物
? 將蛋白固定到胺包被的表面上