AF488 NHS ester 是一種胺特異性熒光探針 (Em=525 nm)。AF488 NHS ester 在水和生物樣品中，與巰基和胺反應(yīng)，并在衍生化后改變它們的化學(xué)結(jié)構(gòu)和熒光性質(zhì)。

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　　AF488 NHS ester的生物活性

　　體外研究

　　AF488 NHS ester 的 IgG 熒光標(biāo)記與抗 IgG 固相肽庫篩選

　　(1) 將凍干的 IgG 以 5 g/L 的濃度溶解在 50 mM 磷酸鈉、20 mM 氯化鈉、PH 8.3 的溶液中。

　　(2) 1 mg AF488 NHS ester 溶于 100 ?L extra dry DMF 中，加入 1 mL (1) 中溶液，室溫旋轉(zhuǎn)孵育 1 h。

　　(3) 用 Amicon Ultra 0.5-mL 離心式過濾裝置，配有 3-kDa MWCO 過濾器收集樣品。

　　(4) 六聚體或四聚體去保護(hù)文庫在 50 mM 磷酸鈉、150 mM 氯化鈉、PH 7.4 (PBS) 溶液中以 5× 沉淀樹脂體積洗滌三次以平衡。

　　(5) 用 50 mM 磷酸鈉、150 mM 氯化鈉、0.2% 吐溫 (PH 7.4) 溶液稀釋 IgG-AF488 至終濃度為 1.3 mg/mL。

　　(6) 將 (4) 和 (5) 在 2-8°C 下孵育過夜。

　　(7) 用 50 mM 磷酸鈉、150 mM 氯化鈉、0.1% 吐溫 20、PH 7.4 (PBS-T) 洗滌樹脂珠。

　　(8) 將樹脂在 40 ?L PBS-T 的 96 孔板中每孔沉積 1 個(gè)珠，然后使用熒光顯微鏡以 10 倍放大率成像。在 480 nm 激發(fā)下，以 510 nm 發(fā)射強(qiáng)度為閾值進(jìn)行 Alexa Fluor 488 熒光測(cè)量和熒光篩選。

　　AF488 NHS ester:https://www.medchemexpress.cn/af488-nhs-ester.html 儲(chǔ)存液

　　用 DMF 配制 20 mM 的 AF488 NHS ester。

　　注：AF488 NHS ester 儲(chǔ)存液建議分裝后于 -20°C 避光保存。

　　MCE尚未獨(dú)立證實(shí)這些方法的準(zhǔn)確性。僅供參考。