? ? ? 南寧食品檢驗(yàn)員資格證報(bào)考專題廣西化妝品檢驗(yàn)員培訓(xùn)報(bào)名指南-配制培養(yǎng)基的4個(gè)原則

1.目的明確?

??? 培養(yǎng)不同的微生物必須采用不同的培養(yǎng)條件；培養(yǎng)目的不同，原料的選擇和配比不同；例如枯草芽孢桿菌：

一般培養(yǎng)：肉湯培養(yǎng)基或LB培養(yǎng)基；

自然轉(zhuǎn)化：基礎(chǔ)培養(yǎng)基；

觀察芽孢：生孢子培養(yǎng)基；

產(chǎn)蛋白酶：以玉米粉、黃豆餅粉為主的產(chǎn)酶培養(yǎng)基；

??? 根據(jù)不同的工作目的，微生物不同的營養(yǎng)需要，運(yùn)用自己豐富的生物化學(xué)和微生物學(xué)知識(shí)來配制最佳的培養(yǎng)基。

? ?北京、上海、廣州、深圳、成都、重慶、杭州、西安、武漢、蘇州、鄭州、南京、天津、長沙、東莞、寧波、佛山、合肥、青島、昆明、沈陽、濟(jì)南、無錫、廈門、福州、溫州、金華、哈爾濱、大連、貴陽、南寧、泉州、石家莊、長春、南昌、惠州、常州、嘉興、徐州、南通、太原、保定、珠海、中山、蘭州、臨沂、濰坊、煙臺(tái)、紹興化妝品廠微生物檢驗(yàn)員（化妝品微檢員），醫(yī)療器械產(chǎn)品無菌檢驗(yàn)員，衛(wèi)生消毒用品無菌檢驗(yàn)員，食品微生物檢驗(yàn)員，約品微生物檢驗(yàn)員，水質(zhì)微生物檢驗(yàn)員等一切涉及微生物檢驗(yàn)的相關(guān)人員，化學(xué)檢驗(yàn)員資格證、考培合格取得微生物檢驗(yàn)員證書；無菌微生物檢驗(yàn)員資格證報(bào)名基本要求及收費(fèi)：18-60周歲，高中及以上學(xué)歷；初級(jí)（五級(jí)1800元/人）；中級(jí)（四級(jí)2000元/人）；高級(jí)（2200元/人）含資料、鑒定考核、證書等，合格由職業(yè)技能鑒定評(píng)價(jià)中心頒發(fā)微生物檢驗(yàn)員證書，終身有效、聯(lián)網(wǎng)注冊。

圣問技術(shù)常年開展如下項(xiàng)目：

1.化妝品檢驗(yàn)員(微生物檢測員、化妝品包裝材料檢驗(yàn)、化妝品添加劑檢驗(yàn))等職業(yè)培訓(xùn);

2.食品安全總監(jiān)、食品安全管理師、公共營養(yǎng)師等；

3.農(nóng)產(chǎn)品食品檢驗(yàn)員(農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全監(jiān)測員、糧油質(zhì)量檢驗(yàn)員、食品檢驗(yàn)員)等職業(yè)資格培訓(xùn);

4.化學(xué)檢驗(yàn)員(化學(xué)檢驗(yàn)員、化妝品檢驗(yàn)員、材料物理性能檢驗(yàn)員、水質(zhì)檢驗(yàn)員)等職業(yè)資格培訓(xùn);

5.內(nèi)審員(ISO22716化妝品GMPC內(nèi)審員;ISO22000化妝品安全管理體系內(nèi)審員;ISO9001質(zhì)量管理體系內(nèi)審員;ISO14000環(huán)境管理體系內(nèi)審員;OHSAS18000職業(yè)健康安全管理內(nèi)審員;IATF16949汽車行業(yè)質(zhì)量管理內(nèi)審員;ISO17025實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理體系內(nèi)審員;ISO13485醫(yī)療器械質(zhì)量管理體系內(nèi)審員)等內(nèi)審員培訓(xùn);

6.化妝品檢驗(yàn)員、微生物檢驗(yàn)員、醫(yī)療器械檢驗(yàn)員、衛(wèi)士消毒產(chǎn)品檢驗(yàn)員；

7.計(jì)量員、內(nèi)校員、計(jì)量管理員、內(nèi)部校驗(yàn)員、儀校員計(jì)量校準(zhǔn)員資格證培訓(xùn)；

8、化妝品安全管理員、化妝品安全管理師、化妝品質(zhì)量管理師、公共營養(yǎng)師、營養(yǎng)配餐師、中式烹調(diào)師、健康管理師等化妝品招投標(biāo)加分證書

9、化妝品、化妝品行業(yè)出廠檢驗(yàn)技能培訓(xùn)（理化檢驗(yàn)及微生物檢驗(yàn)培訓(xùn)）常年開設(shè)。

2.營養(yǎng)協(xié)調(diào)

??? 微生物細(xì)胞組成元素的調(diào)查或分析，是設(shè)計(jì)培養(yǎng)基時(shí)的重要參考依據(jù)。

??? 微生物細(xì)胞內(nèi)各種成分間有一較穩(wěn)定的比例。
???
??? 在大多數(shù)化能異養(yǎng)菌的培養(yǎng)基中，各營養(yǎng)要素間在量上的比例大體符合以下十倍序列的遞減規(guī)律：

???? 要素：H2O＞C源+能源 ＞N 源 ＞P、S＞K、Mg＞生長因子

??? 含量：(～10-1) (～10-2) (～10-3) (～10-4) (～10-5)? (～10-6)

A.選擇適宜的營養(yǎng)物質(zhì),實(shí)驗(yàn)室的常用培養(yǎng)基：

??? 細(xì)菌：牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基（或簡稱普通肉湯培養(yǎng)基）；

??? 放線菌：高氏1號(hào)合成培養(yǎng)基培養(yǎng)；

??? 酵母菌：麥芽汁培養(yǎng)基；

??? 霉菌：查氏合成培養(yǎng)基；

??? 實(shí)驗(yàn)室一般培養(yǎng)：普通常用培養(yǎng)基；

??? 遺傳研究：成分清楚的合成培養(yǎng)基；

??? 生理、代謝研究：選用相應(yīng)的培養(yǎng)基配方；

B.營養(yǎng)物質(zhì)濃度及配比合適

?? 營養(yǎng)物質(zhì)的濃度適宜, 營養(yǎng)物質(zhì)之間的配比適宜；

?? 高濃度糖類物質(zhì)、無機(jī)鹽、重金屬離子等不僅不能維持和促進(jìn)微生物的生長，反而起到抑制或殺菌作用。

???? 培養(yǎng)基中各營養(yǎng)物質(zhì)之間的濃度配比也直接影響微生物的生長繁殖和（或）代謝產(chǎn)物的形成和積累，其中碳氮比（C／N）的影響較大。

真菌需C／N比較高的培養(yǎng)基；（素食）

細(xì)菌（動(dòng)物病原菌）需C／N比較低的培養(yǎng)基；（葷食）

?? 發(fā)酵生產(chǎn)谷氨酸時(shí)：

?? 碳氮比為4/1時(shí)，菌體大量繁殖，谷氨酸積累少；

?? 碳氮比為3/1時(shí)，菌體繁殖受到抑制，谷氨酸產(chǎn)量則大量增加。???????

?????????? NH3 ＞ CO(NH2)2 ＞ NH4NO3 ＞ (NH4)2CO3 ＞ (NH4)2SO4

?? 含氮量（82％）（46％）? （35％）? （29.2％）? （21％）

?????? 這說明在同樣重量時(shí)，在以上各氮源中含氮量以氨為最高，尿素次之，硝酸銨和碳酸銨更次之，而硫酸銨則最低。

3.理化適宜

指培養(yǎng)基的pH值、滲透壓、水活度和氧化還原電勢等物理化學(xué)條件較為適宜。

包括：pH、滲透壓和水活度、氧化還原電位

(1) pH
??? 各大類微生物都有其生長適宜的pH范圍，培養(yǎng)基的pH必須控制在一定的范圍內(nèi)，以滿足不同類型微生物的生長繁殖或產(chǎn)生代謝產(chǎn)物。

??? 通常培養(yǎng)條件：（初始pH ）

??? 細(xì)菌： pH 7.0~8.0

??? 放線菌：pH 7.5~8.5

??? 酵母菌： pH 3.8~6.0

??? 霉菌：pH 4.0~5.8

??? 藻類： pH 6.0~7.0

??? 原生動(dòng)物： pH 6.0~8.0

??? 嗜極菌（extremophiles）

?? 在微生物的生長、代謝過程中會(huì)產(chǎn)生引起培養(yǎng)基pH改變的代謝產(chǎn)物，為了維持培養(yǎng)基pH的相對恒定，通常要進(jìn)行pH的調(diào)節(jié)。

?? pH的調(diào)節(jié)包括pH的內(nèi)源調(diào)節(jié)和pH的外源調(diào)節(jié)。

a.pH的內(nèi)源調(diào)節(jié):通過培養(yǎng)基內(nèi)在成分所起的調(diào)節(jié)作用，就是pH的內(nèi)源調(diào)節(jié)。

?第一種是采用磷酸緩沖液進(jìn)行調(diào)節(jié)。???

［K2HPO4］/［KH2PO4］＝1時(shí)，溶液的pH穩(wěn)定在6.8。

調(diào)節(jié)K2HPO4和KH2PO4兩者濃度比可獲得pH 6.0～7.6間的一系列穩(wěn)定的pH。

反應(yīng)原理：

K2HPO4＋HCl→KH2PO4＋KCl KH2PO4＋KOH→K2HPO4＋H2O

第二種以CaCO3作“備用堿”進(jìn)行調(diào)節(jié)。CaCO3（不溶于水又是沉淀性的，在培養(yǎng)基中分布

不均勻）、NaHCO3均可用來調(diào)節(jié)培養(yǎng)基的pH。

b.pH的外源調(diào)節(jié):

?? 這是一類按實(shí)際需要不斷從外界流加酸或堿液，以調(diào)整培養(yǎng)液的方法。

(2) 滲透壓和水活度

?? 滲透壓（osmotic pressure）是某水溶液中一個(gè)可用壓力來量度的一個(gè)物化指標(biāo)。

?? 它表示兩種濃度不同的溶液間被一個(gè)半透性薄膜隔開時(shí)，稀溶液中的水分子會(huì)因水勢（water?potentiality）的推動(dòng)而透過隔膜流向濃溶液，直到濃溶液產(chǎn)生的機(jī)械壓力足以使兩邊水分子的進(jìn)出達(dá)到平衡為止，這時(shí)由濃溶液中的溶質(zhì)所產(chǎn)生的機(jī)械壓力，即為它的滲透壓值。

?? 與微生物細(xì)胞滲透壓相等的等滲溶液最適宜微生物的生長；

?? 高滲溶液會(huì)使細(xì)胞發(fā)生質(zhì)壁分離；

?? 低滲溶液則會(huì)使細(xì)胞吸水膨脹，形成很高的膨壓，這對細(xì)胞壁脆弱或喪失的各種缺壁細(xì)胞，例如原生質(zhì)體、球狀體或支原體來說，則是致命的。

?? 水活度即aw（wateractivity）是一個(gè)比滲透壓更有生理意義的一個(gè)物化指標(biāo)。它表示在天然或人為環(huán)境中，微生物可實(shí)際利用的自由水或游離水的含量。

各種微生物生長繁殖范圍的aw值在0.998～0.6之間：

（3）氧化還原電勢（redox potential）

?? 又稱氧化還原電位，是度量某氧化還原系統(tǒng)中還原劑釋放電子或氧化劑接受電子趨勢的一種指標(biāo)。
??? 一般以Eh表示，它是指以氫電極為標(biāo)準(zhǔn)時(shí)某氧化還原系統(tǒng)的電極電位值，單位是V（伏）或mV（毫伏）。

不同類型微生物生長對氧化還原電位的要求不同:

?? 好氧性微生物：+0.1伏以上時(shí)可正常生長，以+0.3～+0.4伏為宜；

?? 厭氧性微生物：低于+0.1伏條件下生長；

?? 兼性厭氧微生物：+0.1伏以上時(shí)進(jìn)行好氧呼吸，+0.1伏以下時(shí)進(jìn)行發(fā)酵。

氧化還原電位與氧分壓和pH有關(guān),也受某些微生物代謝產(chǎn)物的影響:

???? 增加通氣量(如振蕩培養(yǎng)、攪拌)提高培養(yǎng)基的氧分壓，或加入氧化劑，從而增加Eh值在培養(yǎng)基中加入巰基乙醇、抗壞血酸（Vc，0.1%）、硫化氫(0.025%)、半胱氨酸（<0.05%）、谷胱甘肽、鐵屑、二硫蘇糖醇、庖肉（瘦牛肉粒）等還原性物質(zhì)可降低Eh值。

???? 測定氧化還原電勢除用電位計(jì)外，還可在培養(yǎng)基中加入化學(xué)指示劑刃天青（resazurin）進(jìn)行間接測定。

???? 刃天青在無氧條件下呈無色（Eh＝-40 mV）；在有氧條件下，其顏色與溶液的pH相關(guān)；（中性——紫色；堿性——藍(lán)色；酸性——紅色）；在微量氧時(shí)，它呈粉紅色。

4.經(jīng)濟(jì)節(jié)約

????? 配制培養(yǎng)基時(shí)應(yīng)盡量利用廉價(jià)且易于獲得的原料作為培養(yǎng)基成份,特別是在發(fā)酵工業(yè)中,以降低??生產(chǎn)成本。???

? (1)以粗代精：對微生物來說，各種粗原料營養(yǎng)更加完全，效果更好。而且在經(jīng)濟(jì)上也節(jié)約。大量的農(nóng)副產(chǎn)品或制品，如麩皮、米糠、玉米漿、酵母浸膏、酒糟、豆餅、花生餅、蛋白胨等都是常用的發(fā)酵工業(yè)原料。

? (2)以“野”代“家”： 以野生植物原料代替栽培植物原料，如木薯、橡子、薯芋等都是富含淀粉質(zhì)的野生植物，可以部分取代糧食用于工業(yè)發(fā)酵的碳源。

? (3)以廢代好：以工農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中易污染環(huán)境的廢棄物作為培養(yǎng)微生物的原料。例如，糖蜜(制糖工業(yè)中含有蔗糖的廢液)、乳清(乳制品工業(yè)中含有乳糖的廢液)、 豆制品工業(yè)廢液、黑廢液(造紙工業(yè)中含有戊糖和己糖的亞硫酸紙漿)等。

?? 工業(yè)上的甲烷發(fā)酵主要利用廢水、廢渣作原料,在我國農(nóng)村，已推廣利用糞便及禾草為原料發(fā)酵生產(chǎn)甲烷作為燃料。

? (4)以簡代繁：某制藥廠改進(jìn)鏈霉素發(fā)酵液中的原有配方，設(shè)法減去30-50%的黃豆餅粉、25%的葡萄糖和20%硫酸銨，結(jié)果反而提高了產(chǎn)量。

?? (5)以氮代朊：以大氣氮、銨鹽、硝酸鹽或尿素等一類非蛋白質(zhì)或非氨基酸廉價(jià)原料用作發(fā)酵培養(yǎng)基的原料，讓微生物轉(zhuǎn)化成菌體蛋白質(zhì)或含氮的發(fā)酵產(chǎn)物供人們利用。

? (6)以纖代糖：開發(fā)利用纖維素這種世界上含量最豐富的可再生資源。將大量的纖維素農(nóng)副產(chǎn)品轉(zhuǎn)變為優(yōu)質(zhì)飼料、工業(yè)發(fā)酵原料、燃料及人類的食品及飲料。

? (7)以“國”代“進(jìn)”： 以國產(chǎn)原料代替進(jìn)口原料，盡量減少工業(yè)成本。國內(nèi)青霉素發(fā)酵工業(yè)的迅速發(fā)展，依賴于找到了富有中國特色的培養(yǎng)基配方，即用廉價(jià)的棉子餅（或花生餅）和白玉米粉代替玉米漿和乳糖。