Jackson公司蛋白質(zhì)電印跡方法：

有三種不同的電印跡方法：濕法、半干法和干法。在所有方法中，凝膠和膜直接接觸，確保它們之間的所有空氣都被排出。（表1）

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Jackson公司：確認(rèn)蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移

蛋白質(zhì)標(biāo)記轉(zhuǎn)移的目視檢查可以粗略評估蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移的效率。然而，臨時膜染色是確定蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移的更準(zhǔn)確的方法。Ponceau S（0.1% w/v Ponceau S，5% v/v?乙酸水溶液）是一種快速簡便的染色劑，與硝酸纖維素膜和?PVDF?膜兼容。

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染色后，蛋白質(zhì)顯示為紅色條帶。條帶的強(qiáng)度表示與膜結(jié)合的蛋白質(zhì)的量，并表示印跡均勻性。

可能會干擾蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移的氣泡顯示為空白圓圈。

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Ponceau S?可以通過用去離子水洗滌去除，并且不影響蛋白質(zhì)印跡的后續(xù)步驟。Ponceau S?的靈敏度低，檢測限相對較低?(250 ng)。其他蛋白質(zhì)染色劑包括膠體金、印度墨水和考馬斯亮藍(lán)。然而，這些不能輕易地用水逆轉(zhuǎn)并阻礙隨后的免疫探測。

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考馬斯亮藍(lán)可用于染色聚丙烯酰胺凝膠以識別任何未能轉(zhuǎn)移的蛋白質(zhì)。確定蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移是否完成對于下游分析很重要。因此，必須通過調(diào)整緩沖液成分和優(yōu)化轉(zhuǎn)移時間來優(yōu)化印跡過程。

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Jackson公司：替代蛋白質(zhì)印跡平臺

已經(jīng)開發(fā)出新技術(shù)來提高生產(chǎn)力和靈活性。新平臺通過結(jié)合毛細(xì)管電泳、微流體和芯片實驗室微分析系統(tǒng)等技術(shù)來縮短分析時間、提供多路檢測并實現(xiàn)高通量。這些小容量設(shè)備可以處理更少量的蛋白質(zhì)，需要更少量的抗體和其他試劑，并降低每次檢測的成本。更快的處理使高通量和多路復(fù)用分析成為可能。

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與傳統(tǒng)的蛋白質(zhì)印跡程序相比，一些新系統(tǒng)在某些情況下甚至表現(xiàn)出更高的靈敏度。已經(jīng)開發(fā)出新技術(shù)來促進(jìn)自動化，減少在傳統(tǒng)蛋白質(zhì)印跡中觀察到的用戶錯誤的可能性，從而提供標(biāo)準(zhǔn)化的結(jié)果。然而，在這些設(shè)備普及之前仍有待改進(jìn)。

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毛細(xì)管電泳

毛細(xì)管電泳分離蛋白質(zhì)，因為它們通過填充有聚合物基質(zhì)的小毛細(xì)管遷移，該聚合物基質(zhì)以類似于聚丙烯酰胺凝膠的方式阻礙它們的遷移。

蛋白質(zhì)從毛細(xì)管洗脫到緩慢移動的膜上，從而解決蛋白質(zhì)大小問題。然后使用傳統(tǒng)的蛋白質(zhì)印跡法探測蛋白質(zhì)。

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微芯片毛細(xì)管電泳

微芯片毛細(xì)管電泳?(MCE)?也使用毛細(xì)管作用來按大小解析蛋白質(zhì)。使用微芯片代替毛細(xì)管。然后將分離的蛋白質(zhì)捕獲在膜上并通過免疫測定進(jìn)行探測。

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2016?年，金等人。與傳統(tǒng)的蛋白質(zhì)印跡相比，使用?MCE?設(shè)備證明了更高的靈敏度和更好的分辨率。

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Herr?小組進(jìn)一步開發(fā)了一種使整個蛋白質(zhì)印跡過程小型化的設(shè)備。光敏凝膠通過光誘導(dǎo)蛋白質(zhì)與凝膠的交聯(lián)來捕獲分離的蛋白質(zhì)，然后進(jìn)行原位免疫探測。

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單細(xì)胞免疫印跡

使用多層微流體裝置實現(xiàn)單細(xì)胞蛋白質(zhì)印跡，允許分析細(xì)胞間的變化。將單個細(xì)胞置于微孔中，并通過“蓋層”添加裂解試劑。

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然后聚丙烯酰胺凝膠基層使用雙向電泳分離蛋白質(zhì)。該技術(shù)已被證明可實現(xiàn)亞細(xì)胞分辨率，并在?6?小時內(nèi)處理?103?個細(xì)胞。

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文獻(xiàn)參考：

布蘭徹?C.等人。（2001?年）。SDS-PAGE?和蛋白質(zhì)印跡技術(shù)。分子醫(yī)學(xué)方法。doi: 10.1385/1-59259-136-1:145。

杰克遜免疫研究實驗室公司（2017?年）。蛋白質(zhì)印跡故障排除指南！

GE醫(yī)療。（2011）。蛋白質(zhì)印跡原理和方法。

巴斯?JJ等人。（2017）。Western Blotting?應(yīng)用于生理研究的技術(shù)考慮概述。斯堪的納維亞運動醫(yī)學(xué)與科學(xué)雜志。doi: 10.1111/sms.12702。

山內(nèi)?KA等人。（2017）。單細(xì)胞的亞細(xì)胞蛋白質(zhì)印跡。微系統(tǒng)和納米工程。doi:10.1038/micronano.2016.79。

桑德斯?BJ等人。（2016?年）。微量蛋白質(zhì)印跡的最新進(jìn)展。分析方法。doi:10.1039/C6AY01947A。

米什拉?A.等人。（2017）。蛋白質(zhì)純化和分析：下一代蛋白質(zhì)印跡技術(shù)。期待評論蛋白質(zhì)組學(xué)。doi:10.1080/14789450.2017.1388167。

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Jackson公司專注于親和純化的二抗和純化免疫球蛋白研究，服務(wù)領(lǐng)域覆蓋各大學(xué)科研所和醫(yī)院里的動物研究以及生物醫(yī)學(xué)研究機(jī)構(gòu)的科學(xué)家。艾美捷科技是Jackson公司的中國代理商，為科研工作者提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品與服務(wù)。