ELISA法結(jié)合qPCR法慢病毒滴度檢測,想怎么測就怎么測~
慢病毒滴度檢測是檢驗(yàn)慢病毒是否合格的方法之一。在一些特定的實(shí)驗(yàn)中,我們需要為病毒的濃度,即滴度,進(jìn)行測定。由于慢病毒載體的不同以及客戶需求的不同,有的慢病毒會(huì)帶有熒光標(biāo)記,而有的沒有,故而滴度檢測也有不同的方法。
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一、ELISA法
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傳統(tǒng)的p24 ELISA可檢測到293細(xì)胞在瞬時(shí)轉(zhuǎn)染過程中產(chǎn)生的病毒相關(guān)p24和游離p24,而游離的p24可以占上清液中p24總量的很大一部分。因此,傳統(tǒng)的p24 ELISA通常會(huì)高估存在的慢病毒的數(shù)量。
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新的QuickTiter慢病毒滴度試劑盒(與慢病毒相關(guān)的HIV p24)可zui大程度地減少此問題。一項(xiàng)專有技術(shù)可在運(yùn)行測定的ELISA部分之前,將慢病毒與溶液中的游離p24分離。
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二、Real-time PCR法
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GeneCopoeia的Lenti-Pac?慢病毒滴度檢測試劑盒系列產(chǎn)品為簡便、快速檢測慢病毒顆粒的滴度而設(shè)計(jì)。試劑盒包含從RNA抽提到qRT- PCR檢測過程的全套試劑,樣品經(jīng)過RNA抽提、DNase消化、反轉(zhuǎn)錄、qRT-PCR步驟即可確定慢病毒滴度。
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特點(diǎn):
1.能夠判斷慢病毒是否包裝成功;
2.準(zhǔn)確測定病毒拷貝數(shù),以確保細(xì)胞轉(zhuǎn)導(dǎo)和基因表達(dá)的效率;
3.提供滴度檢測過程從病毒的RNA提取到qPCR檢測所需要的試劑。
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綜上,慢病毒滴度檢測:ELISA法結(jié)合qPCR法,想怎么測就怎么測~
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