?AGS細胞系來自一名54歲的白人女性患者的胃組織腫瘤碎片，該患者未接受過任何治療。該細胞系與胃腺癌疾病密切相關。迄今為止，已經開發(fā)了使用不同細胞系的胃癌異種移植物的幾種模型。

AGS是胃癌異種移植模型中最常見的細胞系之一。但是，有關此模型的特征的信息有限。因此研究人員通常應用CRISPR / Cas9技術來創(chuàng)建基因敲除或基因敲入AGS細胞系。

AGS敲除細胞系克隆自已用編碼載體轉染的AGS細胞系，然后進行穩(wěn)定的細胞選擇。該細胞系可以穩(wěn)定表達CRISPR Cas9核酸酶，GFP和潮霉素抗性基因。結合單獨轉染的sgRNA，AGS-Cas9 KO細胞系可用于有效產生靶向的基因組修飾，包括基因敲除，基因敲入，基因誘變，基因標記等。它還是sgRNA篩選和篩選的理想細胞系模型。單獨或在池中進行驗證。因此，在涉及胃癌和疾病的研究中，AGS基因敲除細胞系是一種流行的細胞模型。

應用：

使用CRISPR / Cas9基因組編輯系統敲除AGS細胞中的PDEF以研究胃癌

胃癌是全球最常見的惡性腫瘤之一，在中國惡性腫瘤中發(fā)病率和死亡率第二高。前列腺衍生的Ets因子（PDEF）是Ets轉錄因子家族的成員。盡管PDEF在腫瘤發(fā)生中起重要作用，但其在胃癌中的生物學功能仍不清楚。研究人員研究了PDEF在胃癌細胞AGS和正常胃上皮細胞GES中的表達。

CRISPR / Cas9基因組編輯系統用于敲除AGS細胞中的PDEF，作為胃癌的模型。進行評估，然后他們使用CCK-8，流式細胞儀，刮擦傷口和Transwell分析法分別評估PDEF敲除AGS細胞的細胞增殖，凋亡，遷移和侵襲。結果表明，PDEF基因的敲除顯著抑制了AGS GC細胞的遷移，這暗示PDEF在AGS細胞的增殖，遷移和侵襲中起著重要作用，并可能成為胃癌的新治療靶點。在Western blot分析的靈敏度范圍內，用重組質粒pX459-sgRNA1轉染的AGS細胞中的PDEF蛋白根本不表達。降低了PDEF的表達，大大降低了ABS CRISPR細胞的遷移能力，侵襲性和增殖能力。

CRISPR / Cas9介導的LMX1A敲除促進AGS細胞存活和增殖

?LIM同源盒轉錄因子1，α（LMX1A）在人胃癌（GC）中被下調，起著抑癌作用。通過對LMX1A mRNA 3′-非翻譯區(qū)（3′-UTR）的測序分析，表明microRNA-9（miR-9）可能靶向人LMX1A。在已建立基因編輯的AGS細胞和原代人GC細胞中，慢病毒構建體在異位表達miR-9會降低LMX1A 3'-UTR活性，從而導致LMX1A mRNA和蛋白質下調。功能分析表明，miR-9的過表達增強了GC細胞的存活和增殖。相反，antagomir-9慢病毒對miR-9的抑制作用會增加LMX1A 3'-UTR活性，從而上調LMX1A mRNA和蛋白表達，從而導致GC細胞凋亡。 CRISPR / Cas9介導的LMX1A敲除促進了AGS細胞的存活和增殖。重要的是，miR-9和antagomiR-9在LMX1A敲除AGS細胞的功能上無效。因此，敲除AGS細胞系有助于研究胃癌的影響因素。

基因敲除切割效率不僅可以讓人具有生成人糖基化譜和建立調控記錄的能力，而且具有多種優(yōu)勢，是一種特別有吸引力的重組蛋白表達系統。首先，它在谷氨酸上羧基化，在酪氨酸上硫酸化。第二，操作簡單，通過瞬時基因表達可以快速產生重組蛋白。第三，可用于穩(wěn)定的重組蛋白生產。一些研究人員利用基因敲除切割效率系統產生基因編輯細胞系，對GLUL基因組位點進行靶向測序，產生產生產生EPO的穩(wěn)轉細胞系，并發(fā)現重組促紅細胞生成素在人體內穩(wěn)定表達的機制。

源井生物根據客戶需求，結合靶基因的情況進行基因穩(wěn)轉敲除方案設計。

方案1：小片段基因敲除方案，gRNA設在外顯子2兩端的內含子中，敲除外顯子編碼堿基數為非3倍數，敲除后可造成移碼。

方案2：移碼基因敲除方案，gRNA設在外顯子上，缺失的堿基數為非3倍數，敲除后可發(fā)生移碼突變。

方案3：大片段基因敲除方案，將整個基因的編碼序列敲除，達到大片段敲除的效果。

Reference:

?5 Contributions HeLa Cells Have Made to Science.?Cell Science from Technology Networks. Retrieved?2020-03-25.

Yao Ye-bao, Wang Guang-fei, Dong Qing-cai, Cao Cheng. Construction of stable Cdc25C knockout HeLa cell strains using CRISPR/Cas9 gene-editing system, Military Medical Sciences, 2019,42(1):1-5.

Huang Rongfu, Peng Weilin, Lin Jiansheng, Lian Jianfeng, Yang Xiaoyu, Zheng Ming. Construction of stable Cdc25C knockout HeLa cell strains using CRISPR/Cas9 gene-editing system. Military Medical Sciences, 2017,41(5):359-362

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