FITC標記抗體之Marsshall法標記過程

需要材料：

抗體溶液、0.5mol/L pH9.0碳酸鹽緩沖液、無菌生理鹽水、異硫氰酸熒光素、1%硫柳汞水溶液、三角燒瓶（25~50mL）、冰及冰槽（或1000mL燒杯）、電磁攪拌器、滅菌吸管、透吸袋、玻棒、棉線及燒杯（500mL）、pH7.2或pH8.0的0.01mol/L PBS等。

操作過程：

a.抗體的準備：取適量已知抗體濃度的溶液，置入三角燒瓶中，加入生理鹽水及碳酸鹽緩沖液，使最后抗體濃度為20mg/mL，緩沖液容量為總量的1/10，混勻，將三角燒瓶置冰槽中，電磁攪拌（速度適當以不起泡沫為宜）5~10min。

b.熒光素的準備：根據(jù)欲標記的蛋白總量，按每毫克蛋白加0.01mg熒光素，用分析天平準確稱取所需的異硫氰酸熒光素粉末。

c.標記：邊攪拌邊將稱取的熒光色素漸漸加入抗體溶液中，避免將熒光素粘于三角瓶壁或攪拌玻璃棒上（大約5~10min內(nèi)加完）。加畢后，繼續(xù)攪拌12~18h。標記期間應保持蛋白溶液于4攝氏度冰箱或冰庫中。

d.透析：標記完畢后，將標記的抗體溶液離心（2500rpm）20min，除去其中少量的沉淀物，裝入透吸袋中后再置于燒杯中，用pH8.0緩沖鹽水透析（0~4攝氏度）過液。

e.過柱：取透析過液的標記物，過Focudex G-25或者Focudex G-50進行系體置換，然后分裝、貯存于4攝氏度冰箱或冰庫中。

FITC標記抗體的保存

以4攝氏度或-20攝氏度低溫保存，防止抗體活性降低和蛋白質(zhì)變性。最好加入濃度為（1:5000）~（1:10000）的硫柳汞或（1：1000）~（1:5000）的疊氮鈉防腐，小量分裝如0.1~1mL，真空干燥后更易長期保存。

星戈瑞stargraydye分享科研用材料。（2022.2）