歷經(jīng)40余年的發(fā)展，噬菌體展示技術(shù)日趨成熟，已然成為抗體發(fā)現(xiàn)技術(shù)的主流平臺之一。隨著抗體工程的高速發(fā)展，抗體藥從鼠源到全人源的產(chǎn)業(yè)已成趨勢，科研人員對于抗體功能的改造、雙/多特異性抗體的研發(fā)需求更甚，對抗體篩選和優(yōu)化的技術(shù)要求也進一步提高，噬菌體展示技術(shù)也在這個過程中也發(fā)揮越來越重要作用。

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噬菌體展示抗體庫是目前發(fā)展最成熟、應用最為廣泛的基因工程抗體篩選技術(shù)，通過噬菌體展示技術(shù)使基因工程抗體以融合蛋白的形式展示在噬菌體外殼蛋白 gpⅢ或 gpⅧ的 N 端，從而將抗體的基因型和表型連接起來，用固相或液相化抗原與抗體庫孵育，經(jīng)「吸附—洗脫—擴增」數(shù)個循環(huán)使特異性克隆得以富集，因而具有簡便、快速和高效的優(yōu)點。

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噬菌體展示技術(shù)的優(yōu)勢

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1. 方法簡便快速、耗時少。從 mRNA 提取到抗體庫構(gòu)建，繼而篩選出特異性抗體的陽性克隆僅需幾周的時間。

2. 篩選容量大、效率高。噬菌體抗體庫中通常含有 106-109 個不同抗原結(jié)合特異性的抗體分子克隆，可以對百萬乃至億萬個分子進行選擇，且每一輪「吸附-洗脫-擴增」可以使抗原特異性較強的克隆得到富集，非常容易從抗體庫中篩選到特異性抗體。

3. 易于在基因水平操作，蛋白質(zhì)表型與基因型統(tǒng)一?？梢愿鶕?jù)不同目的「隨心所欲」地改造抗體結(jié)構(gòu)、進行基因突變，制備各種新型抗體；另外，還可以將噬菌體抗體與一些功能性分子偶聯(lián)形成免疫毒素、酶標抗體等，進一步拓寬了抗體的應用范圍。

4. 易于規(guī)?；a(chǎn)。

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噬菌體展示技術(shù)流程

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一般來說，噬菌體展示技術(shù)有以下5個步驟:

步驟1:構(gòu)建噬菌體展示庫

重組DNA技術(shù)用于將外來cDNA整合到病毒DNA中。不同的基因組被插入到多個噬菌體的基因組中。剪接到一個外殼蛋白的基因中，使該蛋白顯示在噬菌體顆粒的外面，而這些分離的噬菌體只展示一種蛋白、肽或抗體。這些噬菌體的集合即為庫，如抗體噬菌體庫、蛋白質(zhì)噬菌體庫或隨機噬菌體庫。

步驟2：結(jié)合

這些庫暴露于選定的目標，只有一些噬菌體會與目標相互作用。這些目標是計劃識別特定的配體，如固定的蛋白、細胞表面蛋白或組織細胞表面蛋白。

步驟3：洗滌

未結(jié)合的噬菌體可以被洗滌緩沖液沖走，只留下那些對受體有親和力的噬菌體。

步驟4：洗脫

洗脫緩沖液洗脫回收對目標有親和力的噬菌體

步驟5：放大

展示特異性的洗脫噬菌體被用來感染新的宿主細胞進行擴增，或直接進行細菌感染和擴增回收的噬菌體。

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噬菌體展示技術(shù)由于其廣泛的應用領(lǐng)域備受關(guān)注，這就要求廣大從業(yè)者在熟悉，掌握噬菌體展示技術(shù)的同時，廣泛的開展交流與學習，不斷地在應用噬菌體展示這一技術(shù)的同時取得新的突破。