PMA是比較中肯的v-PCR?染料，并已在數(shù)百份同行評(píng)審的論文和大量細(xì)菌、真菌和病毒菌株中得到驗(yàn)證。早期研究側(cè)重于細(xì)菌中的v-PCR，驗(yàn)證了在數(shù)十種不同細(xì)菌菌株中的程序，例如大腸桿菌、李斯特菌、軍團(tuán)菌、乳酸桿菌、結(jié)核分枝桿菌、衣原體、幽門螺桿菌以及許多其他與人類健康相關(guān)的菌株. v-PCR?在細(xì)菌中的應(yīng)用非常廣泛，但也有許多引文在酵母和真菌、病毒以及各種其他細(xì)胞類型（如古生菌、變形蟲和寄生蟲）中使用?v-PCR。

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已驗(yàn)證的Viability PCR應(yīng)用實(shí)例：

微生物組研究

環(huán)境測(cè)試

益生菌研究

臨床測(cè)試

食品和水衛(wèi)生

葡萄酒發(fā)酵

微生物測(cè)序

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V-PCR的工作原理

PMAxx?和PMA是對(duì)DNA具有高親和力的光活性染料。染料插入dsDNA并在暴露于強(qiáng)烈可見光時(shí)形成共價(jià)鍵。該反應(yīng)通過(guò)在純化過(guò)程中去除修飾的DNA和通過(guò)DNA聚合酶抑制模板擴(kuò)增的組合來(lái)抑制修飾的DNA模板的PCR擴(kuò)增。由于染料是細(xì)胞膜不可滲透的，當(dāng)用染料處理含有活細(xì)菌和死細(xì)菌的樣品時(shí)，只有細(xì)胞膜受損的死細(xì)菌才容易受到DNA修飾。在qPCR反應(yīng)中，死細(xì)胞DNA將顯示出延遲擴(kuò)增和比活細(xì)胞更高的Ct。

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活性PCR染料，如PMAxx?或PMA是膜不滲透的，這使它們具有死細(xì)胞特異性。一旦進(jìn)入死細(xì)胞，它們就會(huì)與DNA結(jié)合。暴露在強(qiáng)烈的可見光下會(huì)使染料具有活性，并使它們共價(jià)附著在DNA上，這種DNA修飾防止了隨后的PCR反應(yīng)中的擴(kuò)增。

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v-PCR工作流程：

v-PCR的基本工作流程如下圖所示（詳細(xì)協(xié)議可在產(chǎn)品頁(yè)面上找到）。它適用于許多不同的樣本類型和實(shí)驗(yàn)設(shè)置。對(duì)于少量培養(yǎng)物，樣品可以在微型離心管中制備，并在PMA-Lite 2.0 LED光解裝置中暴露在光下。

艾美捷?Viability PCR入門套件

可定制的?Viability PCR?入門套件包含使用?PMA?或?PMAxx?活力染料和?qPCR?選擇性檢測(cè)活細(xì)胞所需的材料。這些試劑盒可用于您選擇的任何細(xì)胞類型（有關(guān)已發(fā)布的經(jīng)過(guò)驗(yàn)證的細(xì)胞類型，請(qǐng)參閱PMA/PMAxx?參考列表和經(jīng)過(guò)驗(yàn)證的細(xì)菌菌株列表）。所有試劑盒均包含?Forget-Me-Not EvaGreenqPCR Master Mix，以及您選擇的?PMA?或?PMAxx?染料。您還可以選擇帶有或不帶有革蘭氏陰性細(xì)菌增強(qiáng)劑（不適用于其他細(xì)胞類型）的試劑盒。用戶將需要提供自己的引物來(lái)擴(kuò)增他們感興趣的物種（請(qǐng)參閱此 博客文章 用于引物設(shè)計(jì)考慮）。每個(gè)試劑盒包含的試劑足以處理?80?種細(xì)菌培養(yǎng)物并進(jìn)行200次PCR反應(yīng)。

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試劑盒包括：

PMA?染料或?PMAxx?染料

Forget-Me-Not EvaGreen qPCR預(yù)混液

ROX?參考染料

PMA?增強(qiáng)劑（僅限革蘭氏陰性菌株）

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