艾美捷CompTech人補(bǔ)體C4蛋白（濃縮型）：

名稱(chēng)：?C4 (濃縮) 蛋白

編號(hào)：?A105c

規(guī)格：?1000 μg/vial

濃度：?.0 4 mg/mL (實(shí)際濃度見(jiàn)分析證書(shū))

類(lèi)型?液?體

活動(dòng)：?>70%與正常人血清標(biāo)準(zhǔn)(見(jiàn)Cert。的分析)

純度：?>90%由SDS-PAGE

緩沖區(qū)：?10 mM磷酸鈉，145 mM氯化鈉，pH 7.3

消缺系數(shù)。?A280 nm在 1.0 mg/mL 時(shí) 的=為 1.03

分子量：?205000Da (3鏈)

防腐劑：?無(wú)，0.22μm過(guò)濾。

存儲(chǔ)：?- 7 0oC或以下。避免凍融。

根源?正常的人類(lèi)血清?(經(jīng)認(rèn)證的HBsAg、HTLV-I/II、STS和HCV、 HIV1和HIV-II抗體檢測(cè)均為陰性) 。

預(yù)防措施?在處理人體血液制品時(shí)要采取常規(guī)的預(yù)防措施。

一般說(shuō)明

天然C4是一種天然的糖基化多肽，含有三個(gè)二硫鏈。C4是補(bǔ)體激活的經(jīng)典途徑?和凝集素途徑的激活的核心。每個(gè)途徑的啟動(dòng)產(chǎn)生的蛋白水解酶復(fù)合物?(經(jīng)典途徑中?的C1q/C1r/C1s和凝集素途徑中的MBL/MASP1/MASP2) 與目標(biāo)表面結(jié)合。這些酶在C4中?切割一個(gè)肽鍵，釋放過(guò)敏性毒素C4a并激活C4b。與C3一樣，亞穩(wěn)態(tài)C4b的硫酯具有高??度活性，能夠與C4b與目標(biāo)表面的氨基或羥基反應(yīng)并共價(jià)偶聯(lián)。C4有兩種變體 (C4A和?C4B) 。只有一種類(lèi)型的動(dòng)物通常患有C4B。變體C4A和C4B的有利附著位點(diǎn)不同。C4A ?產(chǎn)生的亞穩(wěn)態(tài)C4b主要附著在氨基上，而C4b變體產(chǎn)生的C4b與羥基和氨基結(jié)合良好????(Law，S。K.A.和多茲。W. (1997)).表面結(jié)合的C4b是C3/C5轉(zhuǎn)化酶復(fù)合物C4b、C2a形?成的基礎(chǔ)。這種酶激活C3，沉積C3b，從而將自己從一個(gè)弱的C5轉(zhuǎn)化酶轉(zhuǎn)化為一個(gè)具??有K的高效C5轉(zhuǎn)化酶m對(duì)于C5的3000倍，比C4b的要低，C2a酶單獨(dú)使用(Rawal?N。和潘?伯恩M。K. (2003)).表面結(jié)合的C4b是一種弱調(diào)理素，可被紅細(xì)胞、淋巴細(xì)胞和吞噬細(xì)?胞上的受體?(CR1) 識(shí)別。C4b的所有補(bǔ)體激活功能在產(chǎn)生C4c和C4d的阿爾法鏈被裂解?時(shí)丟失。只有當(dāng)C4b與C4b結(jié)合蛋白C4因子I輔助因子之一結(jié)合時(shí)，C4b結(jié)合蛋白?(C4bB P) 、膜輔助因子蛋白 (MCP) 或補(bǔ)體受體1 (CR1) ，蛋白酶因子I才能切割C4b。

物理特性和結(jié)構(gòu)

C4是作為單鏈蛋白合成的，但在血漿中以205,000?Da的3鏈分子循環(huán)。在排泄?過(guò)程中，蛋白質(zhì)被糖基化?(6.9 %) ，在阿爾法鏈中形成一個(gè)分子內(nèi)硫酯，并經(jīng)歷有?限的酪氨酸硫酸化。這個(gè)

三個(gè)二硫鍵連接鏈的分子量分別為97、000 (阿爾法) 、75、000 (beta) 和33、?000 (伽馬) 。在補(bǔ)體激活過(guò)程中，C4a?(8,757?MW) 被從阿爾法鏈的n端分離出來(lái)?，產(chǎn)生C4b?(192,000?Da) 。通過(guò)因子I切割表面結(jié)合的C4b，得到可溶性的C4c片?段?(147000Da) 和細(xì)胞結(jié)合的C4d片段?(45000Da) 。

功能

C4被經(jīng)典途徑的C1q-C1r-C1s復(fù)合物或凝集素途徑的M1 (MBL/MASP1/MASP2復(fù)合?物) 中的C1s酶進(jìn)行蛋白水解激活。C4a的釋放留下了亞穩(wěn)態(tài)的C4b，其中硫酯能夠短暫?地將C4b共價(jià)附著在激活表面。這些相同的蛋白酶?(C1和M1) 裂解并激活C2，C2a亞基?與C4b結(jié)合形成C3轉(zhuǎn)化酶 (C4b，C2a) 。C4b是允許C2a作為蛋白酶切割C3和C5的調(diào)節(jié)亞?基。在C3被裂解后，C3b被沉積在形成C5轉(zhuǎn)化酶C3b、C4b、C2a的酶位點(diǎn)上。C3b亞基結(jié)?合C5，允許C4b，C2a酶

蛋白質(zhì)水解C5。雖然C4b，C2a能夠裂解C5，但C5的Km是3000倍，因此它在激活C5方面?的效率按比例低于C3b，C4b，C2a酶。

C4B變體能夠通過(guò)蛋白質(zhì)上的碳水化合物和氨基共價(jià)結(jié)合。這也是其在補(bǔ)體激?活中具有較高的溶血活性的明顯來(lái)源。C4A更喜歡氨基，使其能夠更好地附著在免疫?復(fù)合物等蛋白質(zhì)上。

天然的C3和C4通過(guò)分子內(nèi)硫酯鍵連接其C3d或C4d結(jié)構(gòu)域中的甘氨酸和谷氨酰??胺殘基。這些硫酯鍵容易受到氨、甲胺、羥胺和聯(lián)氨等胺的親核攻擊，所有這些胺都?已被用于滅活補(bǔ)體

血清

純化的c4對(duì)凍融極為敏感，在每次凍融循環(huán)中損失510%的活性。它對(duì)諸如-?20等中間溫度也很敏感oC. 它在中等溫度下停留的時(shí)間越長(zhǎng)，失去的活性就越多?。幾個(gè)小時(shí)oC可以完全滅活它，即使它仍然被完全凍結(jié)。

測(cè)定

C4可以用C4缺失的人或C4缺陷的豚鼠血清進(jìn)行檢測(cè)，因?yàn)樵跊](méi)有C4的情況下?，抗體致敏的綿羊紅細(xì)胞?(EA) 的裂解非常差。使用EA和C4-D豚鼠血清的溶血滴度對(duì)?c4非常敏感，50%的裂解需要小于1?ng?C4。然而，需要注意的是，有一種c4旁路，它?允許c4缺陷和c4耗盡的血清在一定條件下有效地溶解EA(May，J。E.和弗蘭克，M。M.

(?1973) ；Knutzen斯圖爾，K。L.以及其他人(1989)).

參考文獻(xiàn)

Knutzen Steuer KL, Sloan LB, Oglesby TJ, Farries TC, Nickells MW, Densen P, Harley JB, Atkinson JP. (1989) Lysis of sensitized sheep erythrocytes in human sera deficient in the second component of complement. J Immunol. 143:2256-61.

Law, S.K.A. and Dodds, A.W. (1997) Protein Sci. 6:263-274.

Law, S.K.A. and Reid, K.B.M. (1995) Complement 2nd Edition (ISBN 0199633568) Oxford University Press, Oxford.