印跡法（blotting）是指將樣品轉(zhuǎn)移到固相載體上，而后利用相應(yīng)的探測(cè)反應(yīng)來(lái)檢測(cè)樣品的一種方法。1975年，Southern建立了將DNA轉(zhuǎn)移到硝酸纖維素膜（NC膜）上，并利用DNA－RNA雜交檢測(cè)特定的DNA片段的方法，稱為Southern印跡法。而后人們用類似的方法，對(duì)RNA和蛋白質(zhì)進(jìn)行印跡分析，對(duì)RNA的印跡分析稱為Northern印跡法，對(duì)單向電泳后的蛋白質(zhì)分子的印跡分析稱為Western印跡法，對(duì)雙向電泳后蛋白質(zhì)分子的印跡分析稱為Eastern印跡法。

蛋白質(zhì)印跡法首先是要將電泳后分離的蛋白質(zhì)從凝膠中轉(zhuǎn)移到硝酸纖維素膜上，通常有兩種方法：毛細(xì)管印跡法和電泳印跡法。毛細(xì)管印跡法是將凝膠放在緩沖液浸濕的濾紙上，在凝膠上放一片硝酸纖維素膜，再在上面放一層濾紙等吸水物質(zhì)并用重物壓好，緩沖液就會(huì)通過(guò)毛細(xì)作用流過(guò)凝膠。緩沖液通過(guò)凝膠時(shí)會(huì)將蛋白質(zhì)帶到硝酸纖維素膜上，硝酸纖維素膜可以與蛋白質(zhì)通過(guò)疏水相互作用產(chǎn)生不可逆的結(jié)合。這個(gè)過(guò)程持續(xù)過(guò)夜，就可以將凝膠中的蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移到硝酸纖維素膜上。但這種方法轉(zhuǎn)移的效率較低，通常只能轉(zhuǎn)移凝膠中一小部分蛋白質(zhì)（10％～20％）。電泳印跡可以更快速有效的進(jìn)行轉(zhuǎn)移。這種方法是用有孔的塑料和有機(jī)玻璃板將凝膠和硝酸纖維素膜夾成“三明治”形狀，而后浸入兩個(gè)平行電極中間的緩沖液中進(jìn)行電泳，選擇適當(dāng)?shù)碾娪痉较蚓涂梢允沟鞍踪|(zhì)離開(kāi)凝膠結(jié)合在硝酸纖維素膜上。

轉(zhuǎn)移后的硝酸纖維素膜就稱為一個(gè)印跡（blot），用于對(duì)蛋白質(zhì)的進(jìn)一步檢測(cè)。印跡首先用蛋白溶液（如10％的BSA）處理以封閉硝酸纖維素膜上剩余的疏水結(jié)合位點(diǎn)，而后用所要研究的蛋白質(zhì)的抗血清（一抗）處理，印跡中只有待研究的蛋白質(zhì)與一抗結(jié)合，而其它蛋白質(zhì)不與一抗結(jié)合，這樣清洗去除未結(jié)合的一抗后，印跡中只有待研究的蛋白質(zhì)的位置上結(jié)合著一抗。處理過(guò)的印跡進(jìn)一步用適當(dāng)標(biāo)記的二抗處理，二抗是指一抗的抗體，如一抗是從鼠中獲得的，則二抗是抗鼠Ig G的抗體。處理后，帶有標(biāo)記的二抗與一抗結(jié)合，可以指示一抗的位置，即是待研究的蛋白質(zhì)的位置。目前有結(jié)合各種標(biāo)記物的抗特定Ig G的抗體可以直接購(gòu)買作為標(biāo)記的二抗。最常用的一種是酶連的二抗，印跡用酶連二抗處理后，再用適當(dāng)?shù)牡孜锶芤禾幚?，?dāng)酶純化底物生成有顏色的產(chǎn)物時(shí)，就會(huì)產(chǎn)生可見(jiàn)的區(qū)帶，指示所要研究的蛋白質(zhì)的位置。在酶連抗體中使用的酶通常是堿性磷酸酶或辣根過(guò)氧化物酶。堿性磷酸酶可以將無(wú)色的底物5-溴-4-氯吲哚磷酸鹽（BCIP）轉(zhuǎn)化為藍(lán)色的產(chǎn)物；而辣根過(guò)氧化物酶可以以H2O2為底物，將3-氨基-9-乙基咔唑氧化成褐色產(chǎn)物或?qū)?-氯萘酚氧化成藍(lán)色產(chǎn)物。另一種檢測(cè)辣根過(guò)氧化物酶的方法是用增強(qiáng)化學(xué)發(fā)光法，辣根過(guò)氧化物酶在H2O2存在下，氧化化學(xué)發(fā)光物質(zhì)魯米諾（luminol，氨基苯二酰一肼）并發(fā)光，在化學(xué)增強(qiáng)劑存在下光強(qiáng)度可以增大1000倍，通過(guò)將印跡放在照相底片上感光就可以檢測(cè)辣根過(guò)氧化物酶的存在。除了酶連二抗作為指示劑，也可以使用其它指示劑，主要包括以下一些：

I125標(biāo)記的二抗：可以通過(guò)放射性自顯影檢測(cè)。

熒光素異硫氰酸鹽標(biāo)記的二抗：可以通過(guò)在紫外燈下產(chǎn)生熒光來(lái)檢測(cè)。

I125標(biāo)記金黃色葡萄球菌蛋白A（Protein A）：Protein A可以與Ig G的Fc區(qū)特異性的結(jié)合，因此Protein A可以代替二抗：I125標(biāo)記的Protein A通過(guò)放射性自顯影檢測(cè)。

金標(biāo)記的二抗：二抗通過(guò)微小的金顆粒包裹，與一抗結(jié)合時(shí)可以表現(xiàn)紅色。

生物素結(jié)合的二抗：印跡用生物素結(jié)合的二抗處理后，再用堿性磷酸酶或辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的凝集素處理。生物素可以與凝集素緊密結(jié)合，這種方法實(shí)際上相當(dāng)于通過(guò)生物素與凝集素的緊密結(jié)合將二抗與酶連接，通過(guò)酶的顯色反應(yīng)就可以進(jìn)行檢測(cè)。這種方法的優(yōu)點(diǎn)是由于生物素是一個(gè)小分子蛋白，一個(gè)抗體上可以結(jié)合多個(gè)生物素，也就可以結(jié)合多個(gè)酶連接的凝集素，可以大大增強(qiáng)顯色反應(yīng)的信號(hào)。

除了使用抗體或蛋白作為檢測(cè)特定蛋白的探針以外，有時(shí)也使用其它探針如放射性標(biāo)記的DNA，可以檢測(cè)印跡中的DNA結(jié)合蛋白。