1、細(xì)胞培養(yǎng)中出現(xiàn)黑點(diǎn)是污染嗎？

更換血清后發(fā)現(xiàn)細(xì)胞鏡下觀察有黑點(diǎn)，需要肉眼觀察細(xì)胞培養(yǎng)液有無(wú)混濁的情況出現(xiàn)，其次鏡下觀察細(xì)胞中的黑點(diǎn)是否有游動(dòng)，如果細(xì)胞被污染，微生物則會(huì)大量繁殖，培養(yǎng)基就會(huì)迅速變黃、變混濁。污染包括細(xì)菌污染、支原體污染等。

如果在鏡下觀察細(xì)胞，生長(zhǎng)狀態(tài)良好，與黑點(diǎn)出現(xiàn)前相比，沒(méi)有任何變化，那么，黑點(diǎn)的出現(xiàn)有可能與以下幾種情況有關(guān)：

①細(xì)胞生長(zhǎng)過(guò)老，破碎的細(xì)胞殘骸；

②血清等級(jí)不足以維持良好的細(xì)胞生長(zhǎng)

③配制培養(yǎng)基的PH值偏高，不宜細(xì)胞生長(zhǎng)；

④配制培養(yǎng)基的水質(zhì)、容器不合格；

⑤培養(yǎng)原代細(xì)胞中出現(xiàn)小黑點(diǎn)，可能是原代組織中的雜質(zhì)，多次傳代可以消除。

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2、更換血清后細(xì)胞出現(xiàn)死亡？

培養(yǎng)細(xì)胞的死亡原因有多種情況，常見(jiàn)的有以下幾種：

①培養(yǎng)箱內(nèi)溫度波動(dòng)過(guò)大；

②細(xì)胞在凍存或復(fù)蘇過(guò)程中損傷；

③培養(yǎng)液滲透壓不正確；

④培養(yǎng)液中有毒代謝產(chǎn)物堆積；

⑤胰蛋白酶消化過(guò)度；

⑥微生物污染；

⑦細(xì)胞在傳代時(shí)未計(jì)數(shù)、記活率，可能導(dǎo)致細(xì)胞接種密度過(guò)低或過(guò)高不能正常鋪瓶生長(zhǎng)。

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3、臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞原代培養(yǎng)，細(xì)胞出現(xiàn)裂解死亡的情況。

從細(xì)胞圖片分析，客戶在原代分離組織初期未見(jiàn)細(xì)胞爬出、或有零星細(xì)胞生長(zhǎng)，未見(jiàn)細(xì)胞集落，建議客戶對(duì)原代分離的操作步驟做排查。

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4、神經(jīng)母細(xì)胞瘤培養(yǎng)，增殖慢，細(xì)胞易飄起，前期用的是gibco澳胎。

改客戶試用的是優(yōu)級(jí)胎牛血清根據(jù)神經(jīng)類細(xì)胞的分型建議以及客戶之前使用的是gibco澳胎血清培養(yǎng)，還是建議客戶試用特級(jí)胎牛血清對(duì)細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)。

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5、乳腺癌細(xì)胞傳至4帶后增殖較慢，前期生長(zhǎng)不錯(cuò)，增長(zhǎng)1天左右可繼續(xù)傳代，細(xì)胞狀態(tài)良好。增加抗生素濃度后，細(xì)胞生長(zhǎng)較慢。

建議在排除污染情況下，降低抗生素濃度，從消化、傳代是否過(guò)密、細(xì)胞狀態(tài)不佳或老化等方面排查原因。

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6、客戶培養(yǎng)HT22鼠源神經(jīng)細(xì)胞，特級(jí)血清培養(yǎng)，細(xì)胞生長(zhǎng)正常，單總是細(xì)胞有大量聚團(tuán)現(xiàn)象。

有細(xì)胞生長(zhǎng)容易聚團(tuán)建議客戶從傳代時(shí)胰酶消化不當(dāng)、細(xì)胞生長(zhǎng)特性、血清是否存在批間差以及有無(wú)可能感染支原體等方面排除。排查了因消化原因、細(xì)胞特性等原因，疑似支原體導(dǎo)致的細(xì)胞聚團(tuán)，添加了支原體清除劑，使用3天，聚團(tuán)現(xiàn)象好轉(zhuǎn)，停用就反復(fù)。建議繼續(xù)使用支原體清除劑穩(wěn)定一周后再停用觀察細(xì)胞狀態(tài)。