Comet Assay Kits 彗星分析試劑盒是什么，有什么作用，一起來分析一下吧！

首先來看看最常用和高通量篩選這兩種：

1.Comet Assay Kits, 3-Well (3孔玻片)（最常用），規(guī)格15 assays（5片/25片/5*25片）

2.Comet Assay Kits, 96-Well（96孔玻片）（高通量篩選），規(guī)格（1片/5片）

*以下為艾美捷翻譯的中文操作手冊(cè)，請(qǐng)以試劑盒中配套的英文版為準(zhǔn)。因編者翻譯水平有限，對(duì)于由本說明書中不當(dāng)翻譯所造成的損失，概不負(fù)責(zé)，如有錯(cuò)誤，歡迎指正！

實(shí)驗(yàn)開始前，建議先通讀說明書（主要以試劑盒中配套的英文版為準(zhǔn)）：

背景：由于環(huán)境因素和細(xì)胞內(nèi)正常的新陳代謝過程，DNA損傷每天以每個(gè)細(xì)胞1000到100萬個(gè)分子損傷的速度發(fā)生。雖然這只占人類基因組約60億個(gè)堿基(30億個(gè)堿基對(duì))的一小部分，但關(guān)鍵基因的未修復(fù)損傷可能會(huì)阻礙細(xì)胞發(fā)揮其功能的能力，并顯著增加癌癥的可能性。彗星實(shí)驗(yàn)（Comet assay）也被稱為單細(xì)胞凝膠電泳實(shí)驗(yàn)（Single cell gel electrophoresis，SCGE），是一種超靈敏的單細(xì)胞水平上檢測(cè)DNA損傷的技術(shù)。在電泳場(chǎng)下，損傷的細(xì)胞DNA(包含碎片和鏈斷裂)從完整的DNA中分離出來，在顯微鏡下形成典型的“彗星尾巴”形狀。DNA損傷的程度通常是通過測(cè)量彗星尾巴來目測(cè)的，也可以使用圖像分析軟件來測(cè)量各種參數(shù)。

OxiSelect? Comet Assay是一種快速、靈敏的，用于測(cè)量細(xì)胞DNA損傷的試劑盒。每個(gè)試劑盒提供足夠的試劑，zui多可進(jìn)行15次檢測(cè)。

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實(shí)驗(yàn)原理：Cell Biolabs 的 OxiSelect? Comet Assay 是一種單細(xì)胞凝膠電泳法 (SCGE)，用于簡單評(píng)估細(xì)胞 DNA 損傷。首先，將單個(gè)細(xì)胞與低熔點(diǎn)瓊脂混合后，再應(yīng)用到OxiSelect? Comet特制玻片上。然后，用裂解緩沖液和堿性溶液處理這些嵌入的細(xì)胞，使DNA松弛并變性。zui后，在電泳槽中對(duì)進(jìn)行電泳，以分離完整的DNA和受損的片段。電泳后，樣品被干燥，用DNA染料染色，并通過外顯熒光顯微鏡可視化。在這些條件下，受損的DNA（包含裂解和鏈斷裂）將比完整的DNA遷移更多，并產(chǎn)生 "彗星尾 "形狀（見下圖）。

自備材料：

1.氯化鈉粉末

2.NaOH顆粒

3.10 N NaOH，用于調(diào)整pH值 （10 N NaOH = 10 M NaOH =10 mol/L NaOH）

4.DMSO（可選）

5.70%乙醇

6.TE緩沖液（10mM Tris，pH 7.5，1mM EDTA）。

7.PBS（不含Mg2+和Ca2+）。

8.EDTA(二鈉鹽)

9.DI H2O（去離子水）

10.37oC和沸水浴

11.水平電泳槽

12.可調(diào)節(jié)的單通道微量移液器，帶一次性吸頭。

13.帶FITC過濾器的外顯熒光顯微鏡

保存條件：收到試劑盒后，將綠色熒光DNA染料，10000X存放在-20oC。 所有其他試劑盒組件在室溫下儲(chǔ)存。

關(guān)于實(shí)驗(yàn)步驟，因?yàn)槠邢?，大家感興趣的可以搜一下原文，也可以留言哦~

文章來源：

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