一、Southern雜交實驗的基本介紹：
Southern雜交實驗是分子生物學(xué)最經(jīng)典的實驗方法之一。Southern雜交實驗的基本原理是，需要將檢測的DNA樣品固定在固相的載體之上，然后再與標(biāo)記好的核酸探針進行雜交，并與探針具有同源序列的固相DNA位置，顯示出交叉信號。 Southern雜交實驗可以確定出來是否有與探針同源的片段以及檢測到的DNA樣品中片段的長度。某些Southern雜交技術(shù)被廣泛應(yīng)用于遺傳疾病的檢測過程中、DNA指紋檢測分析、以及PCR產(chǎn)物判斷中。但由于Southern雜交技術(shù)的操作繁瑣而且耗時長，因此，目前已經(jīng)有其他更加具備效率的實驗方法可以替代Southern雜交實驗技術(shù)。但該技術(shù)也具有其獨特的實用性和普及性，無法通過其他方法進行代替，例如片段多態(tài)性檢測（RFLP）。

二、Southern 雜交實驗所需材料及試劑：
①實驗變性溶液：0.5M的 NaOH； 1.5 M的氯化鈉。
②實驗中和溶液：1.5M氯化鈉; 1M Tris-HCl（pH 7.4）；
③試驗用轉(zhuǎn)移溶液（20×SSC）：NaCl 175.3g；NaOH調(diào)節(jié)pH值至7.0，檸檬酸三鈉82.2g，加入ddH2O至1000ml。
④過濾用的一次性有機系針頭濾器 尼龍(NY)膜 13mm 0.22um(綠）

二、Southern 雜交實驗步驟

Ⅰ、基因組DNA的限制性消化
Ⅱ、基因組DNA消化產(chǎn)物的瓊脂糖凝膠電泳
Ⅲ、DNA從瓊脂糖凝膠轉(zhuǎn)移到固體支持物
①堿變性：在室溫下將凝膠浸入數(shù)倍于變性溶液體積的凝膠中30分鐘。
②中和：將凝膠轉(zhuǎn)移到中和溶液中15分鐘。
③根據(jù)凝膠的大小轉(zhuǎn)移切割NC膜或尼龍膜，并切掉一個角作為標(biāo)記。浸入水中后，將其浸入轉(zhuǎn)移溶液中5分鐘。切一張長為3mm的Whatman濾紙，將其稍稍寬于膜作為鹽橋，然后壓緊（轉(zhuǎn)移過程通常需要8-24小時，每隔幾個小時更換一次濕紙巾。將轉(zhuǎn)移液切成20的大小×凝膠3-5張濾紙和大量紙巾備用SSC。注意在膜和膠之間不應(yīng)有氣泡，在整個操作過程中，要防止膜污染其他污垢。
④轉(zhuǎn)移后，取出NC膜，將其浸入6×SSC溶液中幾分鐘，以洗去膜上污染的凝膠顆粒，將其置于兩張濾紙之間，在80°C下烘烤2小時，然后將其夾在中間兩層濾紙之間的NC膜，保存在干燥的地方。
Ⅳ、探針標(biāo)記
1. 用于Southern雜交的探針，通常采用放射性物質(zhì)標(biāo)記或用地高辛標(biāo)記。重復(fù)標(biāo)記靈敏度高，效果好；地高辛標(biāo)記的有點在于沒有半衰期，同時具備良好的安全性。
2. 探針標(biāo)記方法包括：隨機引物法，上翻譯法以及末端標(biāo)記法。

文章源于：BIOFOUNT范德生物