細(xì)胞名稱:HepG2(人肝癌細(xì)胞)

　　細(xì)胞別稱:HEP-G2;Hep G2;HEP G2;Hep-G2;HEPG2

　　細(xì)胞貨號:SNL-083

　　生長特性:貼壁

　　培養(yǎng)條件:EMEM(MEM+NEAA)+10%FBS+1%P/S

　　培養(yǎng)環(huán)境:空氣，95%；二氧化碳(CO2)，5%；37℃

　　細(xì)胞簡介:HepG2細(xì)胞是從患有肝癌的15歲白人男性青年的肝細(xì)胞癌中分離出來，細(xì)胞表達(dá)甲胎蛋白、白蛋白α2-巨球蛋白、α1抗胰蛋白酶、轉(zhuǎn)鐵蛋白、α1抗胸腺蛋白酶、結(jié)合珠蛋白、銅藍(lán)蛋白、纖溶酶原補體（C4）、C3活化劑、纖維蛋白原、α1酸性糖蛋白、α2-HS糖蛋白、β-脂蛋白、視黃醇結(jié)合蛋白等基因。HepG2細(xì)胞表達(dá)標(biāo)志物包括胰島素；胰島素樣生長因子II（IGF II）。HepG2細(xì)胞表現(xiàn)3-羥基-3-甲基戊二酰-CoA還原酶和肝甘油三酯脂肪酶活性，對葛蘭素酮（氧化應(yīng)激）的刺激表現(xiàn)為apoA-I mRNA表達(dá)減少、過氧化氫酶mRNA表達(dá)增加。沒有證據(jù)表明HepG2細(xì)胞中存在乙型肝炎病毒基因組。除了基于原始出版物（PubMed:6248960）的所稱的肝細(xì)胞癌或肝癌細(xì)胞系外，HepG2也被稱為肝母細(xì)胞瘤細(xì)胞系（PubMed:19751877）。HepG2細(xì)胞系由Wistar研究所保藏，是合適的轉(zhuǎn)染宿主。

　　HepG2細(xì)胞培養(yǎng)注意事項

　　1、空泡現(xiàn)象

　　HepG2細(xì)胞中常有空泡，這是該細(xì)胞正常特性，不影響細(xì)胞生長，無需擔(dān)心。

　　2、細(xì)胞生長慢

　　培養(yǎng)條件適宜的情況下，在T25培養(yǎng)瓶中生長的HepG2細(xì)胞，以1:2傳代后，培養(yǎng)2-3天可以到達(dá)80%匯合率。若細(xì)胞生長過慢甚至不生長，可將血清增加至15%-20%（不要超過20%），待細(xì)胞恢復(fù)生長速度后再將血清比例降低到10%。

　　細(xì)胞接種密度不可過低，否則生長非常緩慢。

　　3、細(xì)胞聚團(tuán)或不貼壁

　　血清品牌和培養(yǎng)基pH是影響HepG2細(xì)胞貼壁性的關(guān)鍵因素。

　　通常HepG2細(xì)胞呈單層生長，但遇到不合適的血清細(xì)胞可能呈現(xiàn)聚集傾向，最終聚團(tuán)且不易消化開；也可能貼壁性變?nèi)?，漂浮?xì)胞變多。使用高質(zhì)量低內(nèi)毒素未滅活的胎牛血清，可以幫助細(xì)胞更好地貼壁及形成單層細(xì)胞。

　　pH過高過低都將影響細(xì)胞貼壁性，每天觀察培養(yǎng)器皿中培養(yǎng)基的顏色，偏黃及時換液，偏紫時檢查培養(yǎng)箱CO2供應(yīng)是否正常，培養(yǎng)瓶是否透氣，并及時換液。

　　4、漂浮細(xì)胞多

　　排除上文中提到的血清和pH對細(xì)胞貼壁的影響，傳代或復(fù)蘇后若有部分細(xì)胞漂浮，是正常現(xiàn)象，隨著培養(yǎng)部分漂浮細(xì)胞會逐漸貼壁。漂浮細(xì)胞較多時不要扔，使用臺盼藍(lán)檢查細(xì)胞活性，若大部分是活細(xì)胞，將這些細(xì)胞離心收集后重新接種至原瓶。增加血清量（總比例不超過20%）可以促進(jìn)貼壁。

　　消化時需注意時間不能太長，第一次消化該細(xì)胞要摸索最佳時間（操作見后文）。中和時輕柔吹打，控制吹打次數(shù)和力度，可有效減少傳代后漂浮細(xì)胞。

　　5、有圓形細(xì)胞粘附在貼壁的單層細(xì)胞上

　　這在HepG2培養(yǎng)時是常見現(xiàn)象，這些細(xì)胞可能是尚未完全貼壁或者正處于分裂期的細(xì)胞，無需對此特殊處理。

　　HepG2細(xì)胞傳代方法

　　1.準(zhǔn)備所需的培養(yǎng)基、胰酶、PBS、離心管、培養(yǎng)瓶以及無菌槍頭等；（試劑提前預(yù)熱）

　　2.抽走培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)基，加5mL PBS潤洗1-2遍，清除殘留培養(yǎng)基；

　　3.盡量吸干潤洗的PBS后加1mL胰酶，搖晃使胰酶均勻覆蓋瓶底，放置培養(yǎng)箱37℃消化；

　　4.消化時每隔1min拿出來觀察，鏡下可見細(xì)胞明顯回縮，輕拍培養(yǎng)瓶部分細(xì)胞開始脫落時立即加入3-4mL含血清的培養(yǎng)基終止消化，吹落貼壁的細(xì)胞；

　　Tips：注意控制吹打力度輕柔，吹打次數(shù)不可過多，避免機械損傷

　　5.將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至離心管中，1000rpm，3min離心收集細(xì)胞；

　　6.在新的培養(yǎng)瓶中加入適量新鮮培養(yǎng)基；（T25推薦10mL，T75推薦15mL）

　　7.離心完成后，棄上清，加入適量新鮮培養(yǎng)基輕輕重懸吹散細(xì)胞，將細(xì)胞懸液均勻接種至培養(yǎng)瓶中，十字法或8字法混勻，然后放入培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)，注意培養(yǎng)瓶蓋透氣；

　　Tips：推薦傳代比例1:2-1:4，首次傳代建議1:2。細(xì)胞生長至80%密度時即可傳代。