什么是RNA提取

RNA 提取是指從樣品中純化 RNA 的過程。 RNA提取的常規(guī)方法稱為硫氰酸胍-苯酚-氯仿提取。 Guanidinium thiocyanate 使蛋白質(zhì)變性。此外，它破壞水分子的氫鍵并用作離液劑。 RNA 提取中使用一種特殊試劑，稱為三試劑。它含有硫氰酸胍、苯酚和乙酸鈉。 RNA 提取的基本步驟的目的與 DNA 提取的目的相似。 RNA 提取的方案如下所述。

1. 用冰冷的 PBS 洗滌細(xì)胞以維持細(xì)胞的滲透壓。

2. 吸出細(xì)胞并用 Tri-reagent 勻漿樣品。

3. 加入氯仿并搖勻。

4. 離心可能會(huì)出現(xiàn)三層。頂層是透明的水層。中間層或界面包含沉淀的 DNA。底層是有機(jī)層，呈粉紅色。

5. 除去水層并加入異丙醇。離心可能會(huì)產(chǎn)生沉淀。

6. 用 75% 乙醇清洗沉淀。空氣干燥顆粒。

7. 用 TE 緩沖液或水溶解沉淀。

圖 1：RNA 的苯酚-氯仿提取

RNA 提取一般在 pH 值低于 7 時(shí)進(jìn)行。在堿性 pH 值下，由于核糖的 2' 位置存在 OH 基團(tuán)，RNA 更容易被堿性水解降解。 此外，RNA 在酸性 pH 值下傾向于保留在水相中。?