細胞凋亡途徑中各事件的發(fā)生是有時序性的，即各事件按先后順序依次發(fā)生，最終導致凋亡小體的出現(xiàn)，細胞隨著發(fā)生凋亡。典型特征為：細胞膜PS（磷脂酰絲氨酸）的外翻；線粒體膜電位的喪失；細胞核凝縮和斷裂。

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一、PS（磷脂酰絲氨酸）在細胞外膜上的檢測(Annexin V法)

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在正常的活細胞中，磷脂酰絲氨酸（phosphotidylserine，PS）位于細胞膜的內(nèi)側(cè)，但在早期凋亡的細胞中，PS?從細胞膜的內(nèi)側(cè)翻轉(zhuǎn)到細胞膜的表面，暴露在細胞外環(huán)境中。Annexin-V（膜聯(lián)蛋白-V）是一種分子量為35-36KD的Ca2+?依賴性磷脂結(jié)合蛋白，能與PS高親和力結(jié)合。用熒光素（FITC、Alexa Fluor488等）標記的?Annexin-V?作為探針，利用流式細胞儀或熒光顯微鏡可檢測細胞凋亡的發(fā)生。另外，碘化丙啶(propidine iodide, PI)是一種核酸染料，它不能透過完整的細胞膜，但在凋亡中晚期的細胞和死細胞，PI?能夠透過細胞膜而使細胞核紅染。因此將?Annexin-V?與?PI?匹配使用，就可以將凋亡早晚期的細胞以及死細胞區(qū)分開來。

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二、TUNEL（Terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated dUTP nick-end-labeling）

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細胞凋亡晚期，?染色體DNA雙鏈斷裂或單鏈斷裂而產(chǎn)生大量的粘性3-OH末端，可在脫氧核糖核苷酸末端轉(zhuǎn)移酶（TdT）的作用下，將熒光素/酶標記的dUTP結(jié)合到DNA的3-末端，從而可進行凋亡細胞的檢測，這類方法稱為脫氧核糖核苷酸末端轉(zhuǎn)移酶介導的缺口末端標記法（terminal -deoxynucleotidyl transferase mediated nick end labeling，?TUNEL）。由于正常的或正在增殖的細胞幾乎沒有DNA的斷裂，因而沒有3-OH形成，很少能夠被染色。TUNEL實際上是分子生物學與形態(tài)學相結(jié)合的研究方法，對完整的單個凋亡細胞核或凋亡小體進行原位染色，能準確地反應細胞凋亡典型的生物化學和形態(tài)特征，可用于石蠟包埋組織切片、冰凍組織切片、培養(yǎng)的細胞和從組織中分離的細胞的細胞形態(tài)測定，并可檢測出J少量的凋亡細胞，因而在細胞凋亡的研究中被廣泛采用。

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三、相關(guān)研究工具

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