產(chǎn)品介紹：

堿性磷酸酶(Alkaline Phosphatase ,以下簡稱AP)分子量140,000Da,在分子生物學(xué)和蛋白質(zhì)研究中的主要應(yīng)用是從DNA中去除5'-磷酸基團或作為免疫分析（如ELISA）的報告系統(tǒng)。在免疫分析測試中，酶通常與特定的一級或二級抗體結(jié)合，其活性用顯色（或發(fā)光）底物檢測。

本試劑盒可以幫助實驗者快速實現(xiàn)AP與抗體的偶聯(lián)。

基本原理：

本試劑盒利用抗體和AP上游離的伯氨基（-NH2），采用定向?qū)优悸?lián)技術(shù)將抗體分子與AP共價偶聯(lián)，主要特點：

ü??試劑盒組分齊全，操作簡單，只要按照操作步驟進行便可得到高品質(zhì)AP偶聯(lián)抗體；

ü??本試劑盒所配置的AP為高純度，高活性酶，催化發(fā)光/顯色效率更高；

ü??本試劑采用定向偶聯(lián)技術(shù)，AP酶和抗體都不會發(fā)生自連，保證偶聯(lián)物的特異性和均一性；

試劑盒已經(jīng)提供材料：

試劑盒規(guī)格

20X3T

200X1T

200X3T

2000X1T

可標(biāo)抗體量

30∽60ug

100∽200ug

300∽600ug

1∽2mg

可標(biāo)抗體次數(shù)

3

1

3

1

組分名稱

各組分配置數(shù)量

抗體修飾試劑

1支

1支

1支

1支

標(biāo)記緩沖液

30ml

30ml

30ml

30ml

活化AP溶液

10ul*1

40ul*1

80ul*1

300ul*1

標(biāo)記保存液

2ml

2ml

2ml

2ml

30KMWCO超濾管

3支

1支

3支

1支

DMSO溶劑

400ul

400ul

400ul

400ul

說明書

1份

?

其他需要自備試劑材料：

2??待標(biāo)記的生物分子；

2??移液器及吸頭；

2??去離子水。

試劑盒儲存

試劑盒抗體修飾試劑放在-20?C，其余組分放在2-8℃可保存6個月以上。

試劑盒操作流程：

1.抗體的修飾

1）向抗體修飾試劑干粉中加入200ul DMSO,充分混勻;

2）取待標(biāo)記抗體（純度>90%），濃度調(diào)整到 2mg/ml左右為宜，按照每mg抗體加入

30μl?抗體修飾試劑溶液，輕輕混勻，在室溫下避光攪拌反應(yīng) 90分鐘；【如果抗體量太少，抗體修飾試劑溶液加入量不少于0.5ul】

3）反應(yīng)完畢后，將其轉(zhuǎn)入30KMWCO超濾管，用標(biāo)記緩沖液超濾5-10次（每次12000rpm 1min），每次管芯內(nèi)液體體積不超過原體積1/4為宜，最后一次超濾完成，管芯內(nèi)液體即為修飾的抗體。

2.活化AP與抗體偶聯(lián)

1）將修飾抗體與活化AP溶液，按照質(zhì)量比8:1比例（每1mg修飾抗體對應(yīng)125ul活化AP溶液,）混合，室溫避光反應(yīng)1小時；

2）標(biāo)記好的抗體分裝，加入適當(dāng)保護劑，-20℃保存?zhèn)溆谩?/p>

注意事項：

1）本試劑盒中抗體修飾試劑和活化AP溶液為高活性試劑，請-20℃保存；其余成份2-8℃保存、勿凍存。

2）試劑盒組份在運輸過程中可能造成顛倒，會使液體或干粉試劑粘到管壁或瓶蓋上。使用前請離心處理，以使附著管壁或瓶蓋的液體或干粉試劑沉積到管底。

3）抗體修飾試劑需現(xiàn)用現(xiàn)配，干粉溶解后不能長期保存；

4）使用本試劑盒標(biāo)記抗體，其抗體特異性要高，純度不低于90%，最好使用單克隆抗體，溶液環(huán)境不含游離氨基，最好為PBS溶液；標(biāo)記前抗體需去除NaN3和BSA，抗體的透析、濃縮和濃度測定等操作都會造成抗體量的損失，因此標(biāo)記前準(zhǔn)備抗體時需根據(jù)具體情況考慮最適的抗體量；

5）由于抗體修飾后所帶的基團容易被重新氧化，因此修飾后抗體需盡快與活化的AP進行偶聯(lián)；

6）本試劑盒中的超濾管為特殊處理的，可有效避免酶失活和蛋白吸附損失，市面超濾管可能會對標(biāo)記效率造成影響。

7）本試劑盒中部分試劑為高活性試劑，對皮膚和身體有一定的危害，請全程戴手套操作；DMSO屬微毒類，對人體皮膚有滲透性，對眼有刺激作用，使用時避免與皮膚、眼睛和粘膜接觸。

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*本試劑僅供實驗室研究使用