肝硬化動(dòng)物模型【疾病動(dòng)物模型代做】

【造模機(jī)制】CCI 經(jīng)肝微粒體細(xì)胞色家 Pao激活生成三氧化碳(--{CCl),攻擊肝細(xì)胞膜的磷脂,引起脂質(zhì)過(guò)氧化破壞膜性結(jié)構(gòu);—CCI,還與蛋白質(zhì)形成共價(jià)鍵,損害線(xiàn)粒體使還原性輔酶 A(NADH)與三磷腺苷(ATP)在肝內(nèi)生成減少,脂肪酸氧化受到抑制,影響三羧酸循環(huán)致肝細(xì)胞“窒息”死亡:內(nèi)質(zhì)悶受損則脂蛋白合成障礙,甘油三酯和脂肪酸在肝細(xì)胞內(nèi)蓄積。反復(fù)應(yīng)用 CCI 損害肝臟,肝臟“損害-修復(fù)-損害”,并最終形成肝硬化。

【造模方法】

1.小鼠模型用 40%CCL 橄欖油 0.4ml,一次性口服可誘發(fā)小鼠肝小葉中央壞死，CCl油劑皮下注射 1～3ml/kg,每周 2次,肝硬化可在 12～15 周形成。

2.大鼠模型 SD大鼠腹腔注射 30%CCI 溶液 2.0m/ke,每周 2次,共7周形成肝硬化模型。用 CCLO.05m/100g 做皮下注射,可誘發(fā)大鼠脂肪肝、肝硬化;用 CCL0.2ml/100g 做皮下注射,可誘發(fā)大鼠肝細(xì)胞水皰樣變性,缺氧、肝小葉中央壞死;用 QCL 礦物油 0.033m/100g、做腹腔注射,可誘發(fā)大鼠脂肪肝、肝小葉中央壞死;用 CC1,0.5～1.0ml/只一次性口服,可誘發(fā)大鼠肝小葉中央壞死;用 CCLO.5ml/kg一次性灌胃,可誘發(fā)大鼠急性中毒性肝壞死。

3.家兔模型用 CCL1.2ml/kg 一次性口服,可誘發(fā)兔肝小葉中央壞死;用CCI1.0ml/kg一次性口服,可誘發(fā)兔急性中毒性肝壞死。

4.犬模型用 CCL 溶液按 0.12ml/kg,配以等量花生油,清晨空腹經(jīng)腹腔注射,間隔3~4 天注射 1 次,每周注射 2 次,共注藥 8 周,形成肝硬化。

5.貓模型用 CCL 0.3ml/kg 皮下注射,可誘發(fā)貓肝小葉中央壞死、脂肪肝。

【模型特點(diǎn)】CCL 進(jìn)入體內(nèi) 15 分鐘即可引起肝細(xì)胞損害,至 48 小時(shí)達(dá)到高峰,隨后進(jìn)入修復(fù)階段。間隔 3~4 天注藥 1 次,即在一次染毒造成肝損害后的修復(fù)期再次給藥,重復(fù)“損害-修復(fù)-損害”的過(guò)程,從而誘導(dǎo)肝纖維化和肝硬化形成。實(shí)驗(yàn)中大鼠成活率約為60%~80%。

【應(yīng)用范圍】該模型適合于肝硬化發(fā)生發(fā)展過(guò)程的動(dòng)態(tài)研究。

【注意事項(xiàng)】

1.大鼠、小鼠模型 CCI 油劑造模劑量和給藥途徑依動(dòng)物種類(lèi)和造模嚴(yán)重程度不同而有差異。皮下注射過(guò)快吸收入全身循環(huán)系統(tǒng),腦、腎毒性大,注射位置易發(fā)生浸潤(rùn)性膿腫和潰瘍,故死亡率可高達(dá) 30％~40％。降低 CCL濃度可降低死亡率,亦可采用腹腔注射、灌胃,蒸汽吸人及拌于食物中快速口服等方法。腹腔內(nèi)注射門(mén)靜脈濃度高,肝硬化形成時(shí)間短,但死亡率較高(20％~35％);灌胃法亦可直接吸收入肝,但操作復(fù)雜,腸道反應(yīng)大;蒸汽需快速吸人,呼吸道刺激大,動(dòng)物不耐受,中樞毒性大,易污染環(huán)境和傷害實(shí)驗(yàn)人員。溶于少許食物快速口服,少吃多餐,揮發(fā)減少,濃度低胃腸刺激減少,但受動(dòng)物食欲影響,劑量難掌握,實(shí)驗(yàn)終點(diǎn)不明確,周期長(zhǎng)。

2.家兔模型兔用 CCI 造模劑量以 1.0ml/kg 較合適,1.2ml/kg 時(shí),2～3 分鐘內(nèi)有20%～30％動(dòng)物可造成急性中毒死亡?？诜?CCL時(shí),應(yīng)防止誤入氣管。CCL 常配成乳劑使用,如要配成 10%乳劑,可取 5ml 植物油和 5g 阿拉伯膠,放在乳缽中研勻,再加純 CCL,研勻,然后加蒸餾水 10~15ml 調(diào)成粗乳狀,最后加蒸餾水,使總量達(dá)到 100ml,使用時(shí)搖勻。

3.犬模型采用 CCI 造模同時(shí),要求營(yíng)養(yǎng)要進(jìn)行控制,用米飯攪拌豬油為飼料,喂飼量控制在每天 15g/kg 左右,豬油含量為 10%,并以10%乙醇水為唯一飲料。

【模型評(píng)價(jià)】用 CCL誘導(dǎo)中毒性肝纖維化和肝硬化動(dòng)物模型是一種經(jīng)典的造模方法。CCL,所致高膽固醇飲食大鼠肝硬化可靠且復(fù)制時(shí)間短,肝纖維化進(jìn)展穩(wěn)定,是目前國(guó)內(nèi)外常采用的動(dòng)物模型。

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