NIH 3T3細(xì)胞是從NIH瑞士小鼠胚胎中建立的。這些細(xì)胞高度接觸抑制對(duì)肉瘤病毒病灶形成和白血病病毒傳播敏感。細(xì)胞現(xiàn)在已經(jīng)丟失了他們的接觸抑制。已建立的NIH3T3生產(chǎn)線進(jìn)行了5次以上的連續(xù)循環(huán)試驗(yàn)亞克隆以形成具有最適合轉(zhuǎn)化的形態(tài)特征的亞克隆化驗(yàn)?！?T3”名稱是“3天轉(zhuǎn)移，接種物3 x 105”的縮寫細(xì)胞?！澳荖IH3T3細(xì)胞系是zui?常用的成纖維細(xì)胞系之一。Cell Biolabs?/NIH3T3/Cas9細(xì)胞系穩(wěn)定表達(dá)Cas9和嘌呤霉素抗性基因。Cas9和嘌呤霉素耐藥基因均為陰性使用逆轉(zhuǎn)錄病毒導(dǎo)入親代NIH3T3細(xì)胞。

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Cell Biolabs

Cell Biolabs：細(xì)胞學(xué)試劑品牌，為生物技術(shù)和研究類客戶提供基于細(xì)胞功能研究以及疾病等方面的技術(shù)和服務(wù)。主要涵蓋細(xì)胞研究、細(xì)胞信號(hào)通路和蛋白質(zhì)生物學(xué)、代謝研究、病原體和毒素、干細(xì)胞研究等領(lǐng)域。

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Cell Biolabs?/?艾美捷?NIH3T3/Cas9細(xì)胞系表達(dá)Cas9蛋白。檢測(cè)NIH3T3細(xì)胞或NIH3T3/Cas9細(xì)胞用RIPA緩沖液溶解，并使用Cell Biolab的Cas9 ELISA試劑盒（Cat）檢測(cè)Cas9蛋白水平#PRB-5079）（見(jiàn)下圖）。

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該冷凍瓶至少含有1.0×10，6臺(tái)盼藍(lán)形態(tài)學(xué)測(cè)定的NIH3T3/Cas9細(xì)胞染料排除和活細(xì)胞計(jì)數(shù)。NIH3T3/Cas9細(xì)胞經(jīng)測(cè)試無(wú)微生物污染。

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1.培養(yǎng)基：D-MEM（高糖），10%胎牛血清（FBS），0.1 mM MEM非必需氨基酸（NEAA），2 mM L-谷氨酰胺，1%Pen-Strep，（可選）1-2μg/mL嘌呤霉素。

2.冷凍培養(yǎng)基：70%DMEM、20%FBS、10%DMSO。

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過(guò)程：

1.將10毫升完整的DMEM生長(zhǎng)培養(yǎng)基置于50毫升錐形管中。解凍冰凍的食物在37°C水浴中輕輕攪拌，在1-2分鐘內(nèi)將細(xì)胞冷凍。凈化空氣用70%（v/v）乙醇擦拭冷凍瓶表面。

2.將解凍的細(xì)胞懸浮液轉(zhuǎn)移到含有10mL生長(zhǎng)培養(yǎng)基的錐形管中。

3.在室溫下，以1000 rpm的轉(zhuǎn)速離心5分鐘，收集細(xì)胞。移除通過(guò)抽吸生長(zhǎng)培養(yǎng)基。

4.通過(guò)輕輕移液，將細(xì)胞重新懸浮在錐形管中的15ml新鮮生長(zhǎng)培養(yǎng)基中然后下來(lái)。

5.將15 mL細(xì)胞懸浮液轉(zhuǎn)移至T-75組織培養(yǎng)瓶中。將電池置于37°C的溫度下培養(yǎng)箱中的二氧化碳濃度為5%。

6.每天監(jiān)測(cè)細(xì)胞密度。細(xì)胞應(yīng)在培養(yǎng)物達(dá)到95%匯合時(shí)傳代。

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Cell Biolabs?相關(guān)試劑盒研究方案：

1.CBA-100：細(xì)胞選擇??24孔細(xì)胞遷移試驗(yàn)（8μm，比色法）

2.CBA-106：細(xì)胞選擇??96孔細(xì)胞遷移分析（8μm，熒光法）

3.CBA-120：細(xì)胞選擇??24孔傷口愈合試驗(yàn)（顯微鏡）

4.CBA-125：半徑??24孔細(xì)胞遷移分析（顯微鏡）

5.CBA-126：半徑??96孔細(xì)胞遷移分析（顯微鏡）

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艾美捷科技是Cell Biolabs的中國(guó)代理商，為科研工作者提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品與服務(wù)。