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原標(biāo)題：常用細(xì)胞培養(yǎng)基 & 完全培養(yǎng)基配置方法

經(jīng)典的商品化培養(yǎng)基有很多種，其中 DMEM、 RPMI 1640、 MEM 、 DMEM/F12 都是應(yīng)用最廣泛的培養(yǎng)基。其他如：M199 、 IMDM 、 L15培養(yǎng)基等也用于某些細(xì)胞的培養(yǎng)。以下介紹10種常用的商品化細(xì)胞培養(yǎng)基以及培養(yǎng)基選用參考。

1、BME細(xì)胞培養(yǎng)基

基礎(chǔ)Eagle培養(yǎng)基（Basal Medium Eagle），1955年Eagle設(shè)計(jì)，BSS＋12種氨基酸＋谷氨酰胺＋8種維生素。簡(jiǎn)單、便于添加，適于各種傳代細(xì)胞系和特殊研究用，在此基礎(chǔ)上改良的細(xì)胞培養(yǎng)基品種有MEM、DMEM、IMDM等。

2、MEM細(xì)胞培養(yǎng)基

又稱低限量Eagle培養(yǎng)基（Minimal Essential Medium），1959年在Eagle's基礎(chǔ)培養(yǎng)基（BME）上修改而來(lái)，刪去賴氨酸、生物素，氨基酸濃度增加，適合多種細(xì)胞單層生長(zhǎng)，有可高壓滅菌品種，是一種最基本、試用范圍最廣的培養(yǎng)基，但因其營(yíng)養(yǎng)成分所限，針對(duì)生產(chǎn)之特定細(xì)胞培養(yǎng)與表達(dá)時(shí)，并不一定是使用效果最佳或者最經(jīng)濟(jì)的培養(yǎng)基。

3、DMEM細(xì)胞培養(yǎng)基

DMEM是由Dulbecco改良的Eagle培養(yǎng)基，由MEM培養(yǎng)基改良而來(lái)，起初是為小鼠成纖維細(xì)胞設(shè)計(jì)的。DMEM的氨基酸濃度是MEM的兩倍，維生素濃度是MEM的4倍，采用雙倍的HCO3-和CO2濃度起到更好的緩沖作用。最初的配方中葡萄糖含量為1000 mg/L，后來(lái)為了某些細(xì)胞的生長(zhǎng)需要，將葡萄糖含量又調(diào)整為4500 mg/L，這就是大家常說(shuō)的低糖和高糖了。

DMEM培養(yǎng)基是貼壁培養(yǎng)細(xì)胞優(yōu)先選擇的一款培養(yǎng)基。根據(jù)葡萄糖含量的高低，DMEM培養(yǎng)基一般可以區(qū)分為高糖型(低于4500mg/L)和低糖型(低于1000mg/L)兩種。其中，高糖型DMEM培養(yǎng)基有利于細(xì)胞停泊于一個(gè)位置生長(zhǎng)，適于生長(zhǎng)較快、附著較困難的腫瘤細(xì)胞等。而做單抗細(xì)胞融合時(shí)，則一般會(huì)選用使用低糖型DMEM培養(yǎng)基。高糖型DMEM使細(xì)胞生長(zhǎng)過(guò)快，反而不利于融合細(xì)胞的染色體穩(wěn)定。

DMEM培養(yǎng)基的高糖與低糖有哪些區(qū)別？

• 用途不同：低糖DMEM用于養(yǎng)干細(xì)胞可防分化，高糖DMEM可以養(yǎng)大多數(shù)哺乳動(dòng)物的細(xì)胞。

• 適用性不同：高糖DMEM?適于培養(yǎng)代謝旺盛的細(xì)胞，而低糖適于培養(yǎng)一般代謝水平的細(xì)胞。代謝活躍的細(xì)胞，如ES，低糖培養(yǎng)基不能提供足夠的碳源。

• 性質(zhì)不同：低糖的酵母適合在7%以下的糖濃度中生存，而高糖的酵母適合在7%以上糖濃度中生存。

• DMEM高糖培養(yǎng)基P04-04550含穩(wěn)定谷氨酰胺，含25mM Hepes，不含丙酮酸鈉，廣泛應(yīng)用于支持哺乳動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的廣譜培養(yǎng)基。相比于BME中增加了4倍的氨基酸和維生素含量。來(lái)源：用來(lái)培養(yǎng)未轉(zhuǎn)化過(guò)的老鼠和雞的細(xì)胞培養(yǎng)。有高糖（4.5g/l）、低糖(1g/l)和無(wú)糖等類型。

4、IMDM細(xì)胞培養(yǎng)基

Guilber 和Iscove將Dulbecco' Medium 改良為 Iscove's Medium，用于培養(yǎng)紅細(xì)胞和巨噬細(xì)胞前體。此種培養(yǎng)液含有硒、額外的氨基酸和維生素、丙酮酸鈉和HEPES。并用硝酸鉀取代了硝酸鐵。IMDM還能夠促進(jìn)小鼠B淋巴細(xì)胞，LPS刺激的B細(xì)胞，骨髓造血細(xì)胞，T細(xì)胞和淋巴瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)。IMDM為營(yíng)養(yǎng)非常豐富的培養(yǎng)液，因此可以用于高密度細(xì)胞的快速增殖培養(yǎng)。

5、RPMI-1640細(xì)胞培養(yǎng)基

Moore等人于1967年在Roswell Park Memorial Institute研制，針對(duì)淋巴細(xì)胞培養(yǎng)設(shè)計(jì)，含BSS＋21種氨基酸＋維生素11種等?，F(xiàn)也用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，如哺乳動(dòng)物、特殊造血細(xì)胞、正常或惡性增生的白細(xì)胞，雜交瘤細(xì)胞的培養(yǎng)，其它像K-562、HL-60、Jurkat、Daudi、IM-9等成淋巴細(xì)胞、T細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞以及HCT-15上皮細(xì)胞等均可參考使用。

6、HamF10細(xì)胞培養(yǎng)基

1963年Ham設(shè)計(jì)，含微量元素，可在血清含量低時(shí)用，適用于克隆化培養(yǎng)。F10適用于倉(cāng)鼠、人二倍體細(xì)胞，特適于羊水細(xì)胞培養(yǎng)。

7、DMEM/F12細(xì)胞培養(yǎng)基

Ham's F12是為在低血清濃度下克隆CHO細(xì)胞而設(shè)計(jì)的，現(xiàn)在也廣泛應(yīng)用于克隆形成率的分析及原代培養(yǎng)。F12還可以與DMEM等體積混合使用，得到一種高濃度與成分多樣化相結(jié)合的產(chǎn)物，這種培養(yǎng)基已應(yīng)用于許多原代培養(yǎng)及更難養(yǎng)的細(xì)胞系的培養(yǎng)。由于營(yíng)養(yǎng)成分豐富，且可以使用較少血清，故也常作為無(wú)血清培養(yǎng)基的基礎(chǔ)培養(yǎng)基。

8、M199細(xì)胞培養(yǎng)基

1950年Morgan等設(shè)計(jì)的具有確定化學(xué)成分的細(xì)胞培養(yǎng)液，即M-199。除BSS外，含有53種成分，為全面培養(yǎng)基，主要用于雞胚成纖維細(xì)胞培養(yǎng)。此培養(yǎng)液必須輔以血清才能支持長(zhǎng)期培養(yǎng)。M-199可用于培養(yǎng)多種種屬來(lái)源的細(xì)胞，并能培養(yǎng)轉(zhuǎn)染的細(xì)胞?，F(xiàn)廣泛用于病毒學(xué)、疫苗生產(chǎn)。

9、McCoy5A培養(yǎng)基

1959年MeCoy為肉瘤細(xì)胞設(shè)計(jì)，BSS＋40種成分?？芍С侄喾N（如骨髓、皮膚、肺和脾臟等）的原代移植物的生長(zhǎng)，除適于一般的原代細(xì)胞培養(yǎng)外，主要用于作組織活檢培養(yǎng)、一些淋巴細(xì)胞培養(yǎng)以及一些難培養(yǎng)細(xì)胞的生長(zhǎng)支持。例如Jensen大鼠肉瘤成纖維細(xì)胞、人淋巴細(xì)胞、HT-29、BHL-100等上皮細(xì)胞。

10、L15 細(xì)胞培養(yǎng)基

L-15培養(yǎng)液適用于快速增殖瘤細(xì)胞的培養(yǎng)，用于在CO2缺乏的情況下培養(yǎng)腫瘤細(xì)胞株。此培養(yǎng)液采用磷酸鹽緩沖體系，氨基酸組成進(jìn)一步改良，并由半乳糖替代了葡萄糖。

至于選擇何種培養(yǎng)基并沒(méi)有一定的標(biāo)準(zhǔn)，有幾點(diǎn)建議可供參考：

(1) 建立某種細(xì)胞株所用的培養(yǎng)基應(yīng)該是培養(yǎng)這種細(xì)胞首選的培養(yǎng)基?？梢圆殚唴⒖嘉墨I(xiàn)，或在購(gòu)買細(xì)胞株時(shí)咨詢。也可以在一些生物公司的網(wǎng)站上搜索，如Invitrogen網(wǎng)站上有一個(gè)Cell Line Database的工具，選擇你感興趣的細(xì)胞類型，它就會(huì)彈出推薦的培養(yǎng)基、血清和轉(zhuǎn)染試劑等，有時(shí)還有優(yōu)化好的轉(zhuǎn)染步驟，很方便。

(2) 其它實(shí)驗(yàn)室慣用的培養(yǎng)基不妨一試，許多培養(yǎng)基可以適合多種細(xì)胞。

(3) 根據(jù)細(xì)胞株的特點(diǎn)、實(shí)驗(yàn)的需要來(lái)選擇培養(yǎng)基。如小鼠細(xì)胞株多選RPMI1640 。

(4) 用多種培養(yǎng)基培養(yǎng)目的細(xì)胞，觀察其生長(zhǎng)狀態(tài)，可以用生長(zhǎng)曲線、集落形成率等指標(biāo)判斷，根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果選擇最佳培養(yǎng)基，這是最客觀的方法，但比較繁瑣。

關(guān)于EDTA：

細(xì)胞培養(yǎng)液中是不可能含有EDTA的，EDTA會(huì)螯合Ca2+和Mg2+，而鈣鎂離子是細(xì)胞貼壁和正常生長(zhǎng)所必須的。
而消化細(xì)胞用的胰酶中一般含有EDTA，目的是螯合掉培養(yǎng)基中的這兩個(gè)離子，防止鈣鎂離子抑制胰酶活性，以便胰酶將細(xì)胞消化下來(lái)。

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