實(shí)驗(yàn)二：

蛙心灌流

實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?/p>

1．?學(xué)習(xí)離體蛙心的灌流方法。

2．?觀察灌流液中集中離子濃度的改變、相應(yīng)受體的激動劑和阻斷劑對心臟收縮活動的影響。

實(shí)驗(yàn)原理：

兩棲類動物的離體心臟，用與其內(nèi)環(huán)境相似的任氏液灌流，在一定時間內(nèi)，仍能維持節(jié)律性收縮和舒張。改變?nèi)问弦旱慕M成成分，如分別改變Na+、K+、Ca2+的濃度、堿度等，心臟跳動的頻率和幅度就會發(fā)生相應(yīng)的改變。

實(shí)驗(yàn)對象：

蟾蜍

實(shí)驗(yàn)原理：

1.離體蛙心臟標(biāo)本的制備

（1）?破壞蛙中樞神經(jīng)系統(tǒng)

（2）?暴露心臟，固定蛙心

（3）?動脈插管，游離心臟

2.連接實(shí)驗(yàn)裝置

觀察項(xiàng)目及結(jié)果分析

實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目

實(shí)驗(yàn)結(jié)果（定性描述）

結(jié)果分析

?

幅度

節(jié)律

?

正常蛙心收縮活動

適中

適中

處于與內(nèi)環(huán)境相似的任氏液中蛙心以正常節(jié)律收縮和舒張

以0.65%NaCl溶液替換任氏液

稍微減小

稍微減弱

相當(dāng)于細(xì)胞外外環(huán)境中缺乏Ca2+，動作電位2期Ca2+內(nèi)流減少，胞漿中Ca2+減少，心肌收縮力降低

灌流液中加入2%CaCl2(50ul)溶液

稍微加大

稍微加快

細(xì)胞外液濃度升高，動作電位2期Ca2+內(nèi)流增更多，心肌收縮力增強(qiáng)；慢反應(yīng)細(xì)胞4期去極速度加快、心率增快

灌流液中加入1%KCl(50ul)溶液

稍微加大

稍微加快

K+與Ca2+在細(xì)胞膜上有競爭性抑制；細(xì)胞外液中K+濃度升高，Ca2+內(nèi)流減少，心肌的興奮性減弱、收縮力降低

灌流液中加入10-4腎上腺素溶液(50ul)

大幅加大

大幅加快

腎上腺素與心肌細(xì)胞膜上受體結(jié)合，心肌細(xì)胞和肌漿網(wǎng)膜對Ca2+的通透性增強(qiáng)，Ca2+內(nèi)流增加、心肌收縮力增大

灌流液中加入10-5乙酰膽堿溶液(50ul)

大幅減小

大幅減慢

乙酰膽堿與心肌細(xì)胞膜上M受體結(jié)合，心肌細(xì)胞對K+通透性的增強(qiáng)，Ca2+內(nèi)流減少、心肌收縮力降低

灌流液中加入0.05%阿托品(50ul)，20秒以后再加入10-5乙酰膽堿溶液(50ul)

接近正常

接近正常

阿托品是M受體阻斷劑，可抑制Ach減慢心率，增加心房收縮力，維持心率及心肌收縮力不變

?

注意事項(xiàng)：

1　?實(shí)驗(yàn)過程中，要經(jīng)常用任氏液保持心臟的濕潤。

2　?當(dāng)每種化學(xué)藥物(尤其是抑制心臟活動的藥物)作用已經(jīng)明顯時，應(yīng)立即換洗，以免心肌受損。反復(fù)用任氏液換洗數(shù)次，待心跳恢復(fù)正常后再進(jìn)行下一步實(shí)驗(yàn)。

3　?做每項(xiàng)實(shí)驗(yàn)時間均應(yīng)保持插管內(nèi)的液面在相同高度。

4　?不同藥物之間不能混用滴管，以免影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

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