在類器官培養(yǎng)過(guò)程中，基質(zhì)膠如同房屋材料，類器官如同居民，技術(shù)人員如同建筑者。房屋不夠牢固，遭罪的是居民，辛苦的是建筑者。因此，培養(yǎng)類器官不僅所使用的基質(zhì)膠質(zhì)量要好，技術(shù)人員的操作手法也同樣重要！

關(guān)于基質(zhì)膠，你知道多少？

基質(zhì)膠是什么？為什么用基質(zhì)膠來(lái)培養(yǎng)類官？

基質(zhì)膠來(lái)自Engelbreth-Holm-Swarm（EHS）小鼠肉瘤的可溶性基底膜基質(zhì)提取物，主要成分包含層粘連蛋白、IV型膠原、巢蛋白、硫酸肝素糖蛋白，還包含多種生長(zhǎng)因子。

類器官在培養(yǎng)過(guò)程中需要某種介質(zhì)給予支撐從而形成3D結(jié)構(gòu)，以高效還原原體內(nèi)器官組織的環(huán)境。而基質(zhì)膠中含有的層粘連蛋白、膠原和巢蛋白等成分，為類器官形成三維空間結(jié)構(gòu)提供基質(zhì)。

為什么低因子基質(zhì)膠更適合類器官培養(yǎng)，有比較推薦的用于培養(yǎng)類器官的基質(zhì)膠嗎？

在培養(yǎng)過(guò)程中，類器官容易受到細(xì)胞因子的影響進(jìn)而導(dǎo)致不定向分化，甚至凋亡。低因子基質(zhì)膠恰好完善了這一點(diǎn)，更適合于類器官培養(yǎng)或?qū)啄ぶ苽湟筝^高的研究。

伯楨生物始終為國(guó)內(nèi)腫瘤類器官的研發(fā)和臨床應(yīng)用提供良好的材料支撐。

伯楨為類器官量身定制

Organoid Culture ECM (Reduced Growth Factor)

貨號(hào)：M315066

主要成分：層粘連蛋白、IV型膠原、巢蛋白和硫酸肝素糖蛋白

特點(diǎn)特性：

? ? ? ?1.低生長(zhǎng)因子，高濃度支撐；

? ? ? ?2.溫度高于10°C，M315066將開(kāi)始凝膠化。

用途：

? ? ? ??支持人類胚胎干細(xì)胞（hESC）和組織來(lái)源干細(xì)胞的生長(zhǎng)和維持，以及來(lái)自不同器官的健康和腫瘤類器官的體內(nèi)研究。

儲(chǔ)存條件：建議在-20℃或-80℃的環(huán)境中保存，提前分裝，避免反復(fù)凍融。

關(guān)于鋪膠，你知道多少？

擁有了高品質(zhì)基質(zhì)膠，但仍然沒(méi)有擺脫鋪膠過(guò)程中出現(xiàn)的各種問(wèn)題，你都遇到過(guò)什么問(wèn)題？

01? ?為何您鋪的膠會(huì)松散？

為什么我鋪的膠總會(huì)松散？

類器官分泌物可能會(huì)溶解基質(zhì)膠（eg：胃癌類器官），類似情況建議每天更換一次新的完全培養(yǎng)基即可。此外，基質(zhì)膠濃度也是有影響的。

基質(zhì)膠體積占比有要求嗎，需要培養(yǎng)基稀釋嗎？

基質(zhì)膠濃度不要低于70%(ECM:培養(yǎng)基=7:3)，否則會(huì)出現(xiàn)松散現(xiàn)象，是否稀釋也要根據(jù)您的類器官最后富集的量以及實(shí)驗(yàn)?zāi)康亩?。并且膠未凝固就加入培養(yǎng)基，同樣會(huì)如此，建議適當(dāng)延長(zhǎng)凝膠時(shí)間。

不同孔板培養(yǎng)類器官基質(zhì)膠的量有要求嗎？

我們通常用的24孔板每孔大概20-30ul基質(zhì)膠；48孔板每孔大概10-15ul基質(zhì)膠；96孔板每孔大概5ul基質(zhì)膠，具體還要根據(jù)實(shí)際情況而定的。

原代構(gòu)建時(shí)，沒(méi)有裂解紅細(xì)胞也會(huì)造成后續(xù)基質(zhì)膠飄散？

是的。紅細(xì)胞的外殼像橡皮球一樣富有彈性，細(xì)小到可以從血管的細(xì)小毛細(xì)管中順利流出。在類器官培養(yǎng)過(guò)程中，隨著溫度升高，數(shù)量多又細(xì)小的紅細(xì)胞同樣可以從基質(zhì)膠中析出，附在基質(zhì)膠外圍降低了基質(zhì)膠與培養(yǎng)板間的吸附力，進(jìn)而導(dǎo)致膠裂膠散。此時(shí)，擁有一瓶?jī)?yōu)質(zhì)的裂紅液是有必要的，推薦伯楨裂紅液（E238010），溫和不刺激，保護(hù)組織樣本的同時(shí)，有效去除數(shù)量龐大的紅細(xì)胞。

原理：利用細(xì)胞內(nèi)外存在鹽離子濃度差而導(dǎo)致細(xì)胞膜脹破的原理來(lái)裂解無(wú)核紅細(xì)胞的溫和型紅細(xì)胞裂解液。

注意：本產(chǎn)品經(jīng)無(wú)菌處理，主要用于經(jīng)酶消化分散的組織細(xì)胞的分離純化，淋巴細(xì)胞的分離純化以及組織細(xì)胞蛋白與核酸提取等實(shí)驗(yàn)中紅細(xì)胞的去除。

02? ?為何您鋪的膠充滿氣泡？

這段時(shí)間我的膠總是很濃稠的樣子，一吹打就有小細(xì)泡，鋪膠都沒(méi)信心了！

您是不是用力吹打了呀，或者您的室溫是不是很高，甚至冷藏冰箱溫度都高于4℃？

冰箱溫度確實(shí)高了，但就算如此，這一批基質(zhì)膠感覺(jué)都很濃稠，愛(ài)起泡泡呢！

操作時(shí)注意室溫，如果出現(xiàn)氣泡可以將膠放回冰上2-5分鐘，讓氣泡漂浮于上層，再吸取下層基質(zhì)膠使用。此外，使用時(shí)記得把基質(zhì)膠放在冰盒（-20℃冷凍）上，防止基質(zhì)膠凝固。您說(shuō)這批基質(zhì)膠都濃稠，有可能源頭分裝時(shí)出了問(wèn)題，分裝前要將小瓶浸入冰中再放在4°C的冰箱中，過(guò)夜融化為澄清且透明的液體，旋轉(zhuǎn)小瓶以確?；靹蚯覠o(wú)冰晶或膠塊殘留后，將其分裝到冰上的預(yù)冷管中，并立即放置在-20°C中保存，現(xiàn)用現(xiàn)4°C融化。

分裝如果發(fā)生堵塞怎么辦？

如果發(fā)生堵塞，可以將基質(zhì)膠在4°C的冰中放置24-48小時(shí)來(lái)重新液化。若有無(wú)法融化的凝膠可能是融化操作不規(guī)范或者融化期間環(huán)境溫度升高導(dǎo)致部分凝膠，因此要確保融化時(shí)處于低溫環(huán)境！

那我們可以將基質(zhì)膠一直放在4℃冰箱嗎？

不可以的，基質(zhì)膠本質(zhì)是蛋白質(zhì)，不可以長(zhǎng)期置于4℃，也不要反復(fù)凍融，會(huì)影響基質(zhì)膠內(nèi)蛋白活性，最好現(xiàn)用現(xiàn)融化，盡快使用完。

03? ?為何鋪的膠分層明顯，類器官貼壁嚴(yán)重？

我的類器官為什么總貼壁？

因?yàn)殇伳z時(shí)，類器官會(huì)受重力影響而下沉，如果您的基質(zhì)膠濃度不夠支撐，便容易產(chǎn)生此現(xiàn)象。建議M315066占比高于70%，鋪膠后凝膠過(guò)程可以將孔板倒置。

我鋪的膠后來(lái)一看分層了，甚至膠裂，好影響視覺(jué)效果啊。

鋪膠的時(shí)候操作要注意一次性打膠，動(dòng)作不要太慢，否則室溫控制不好時(shí)，膠在凝固過(guò)程中，再補(bǔ)膠就會(huì)分層。此外，膠放4℃太久，流動(dòng)性差不均勻了就會(huì)導(dǎo)致分層甚至膠裂。

我發(fā)現(xiàn)基質(zhì)膠邊緣類器官狀態(tài)較中心部位的要好，這是為什么呢？

孔板底部鋪的膠呈立體水滴狀，在基質(zhì)膠邊緣的類器官處于薄層部位，可以更近距離接觸到完全培養(yǎng)基，相比受重力影響的中間部位類器官來(lái)說(shuō)，營(yíng)養(yǎng)攝取的更快些，屬于正?，F(xiàn)象。不過(guò)這也提示您在最后種膠時(shí)一定要將類器官與基質(zhì)膠混合均勻，減少此現(xiàn)象發(fā)生。

ATTENTION

1.基質(zhì)膠到貨時(shí)要確認(rèn)是否干冰運(yùn)輸，包裝箱內(nèi)干冰是否足量；

2.基質(zhì)膠使用過(guò)程中，發(fā)生凝固現(xiàn)象后不建議繼續(xù)使用；

3.涉及基質(zhì)膠的操作過(guò)程中要注意溫度和速度，保持低溫且快速。并且與基質(zhì)膠接觸的所有耗材需預(yù)先冷卻；

4.基質(zhì)膠長(zhǎng)期保存（一個(gè)月以上），請(qǐng)放置-80℃；

5.基質(zhì)膠避免多次循環(huán)凍融，首次融化后盡量按照單次使用量進(jìn)行分裝，放置于-20℃，減少后期凍融次數(shù)；

6.基質(zhì)膠重懸類器官時(shí)，基質(zhì)膠占比要高于70%，否則膠滴易散開(kāi)，重懸過(guò)程禁止產(chǎn)生氣泡。