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關(guān)于細(xì)胞實(shí)驗(yàn)受支原體污染,你需要了解這些

2023-04-07 15:57 作者:bili_402679761  | 我要投稿



現(xiàn)如今,從生物石油到藥品、醫(yī)療等各方各面,均與生命科學(xué)息息相關(guān)。而細(xì)胞培養(yǎng)是當(dāng)前整個(gè)生命科學(xué)研究中最基本的實(shí)驗(yàn)技術(shù)。干細(xì)胞生物學(xué)和疫苗研發(fā)等領(lǐng)域的發(fā)展及其應(yīng)用在很大程度上是基于細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)的發(fā)展。

細(xì)胞培養(yǎng)是將組織或原代外植塊的細(xì)胞分散開來,使呈細(xì)胞懸液,然后將其培養(yǎng)于固體基質(zhì)上貼壁生長(zhǎng),或使其在培養(yǎng)基中懸浮生長(zhǎng)。


細(xì)胞株是生命科學(xué)研究的重要材料,而零污染的細(xì)胞株更是獲得可靠實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的前提。





細(xì)胞株的微生物污染源一般有細(xì)菌、真菌、支原體。而其中支原體污染率竟高達(dá)30%~60%。支原體污染如此普遍的部分原因在于,即使在常規(guī)傳代培養(yǎng)中,其也能有效地傳播。




支原體又稱霉形體,直徑在0.1-0.3μm,是目前發(fā)現(xiàn)的最小的、最簡(jiǎn)單的原核生物。支原體可以輕松地通過濾膜,混入培養(yǎng)系統(tǒng)中,呈高度多形性,有球形、桿形、絲狀、分支狀等多種形態(tài)。通常依附在細(xì)胞膜表面,支原體沒有剛性的細(xì)胞壁,因此普通的抗生素對(duì)它無效。


實(shí)驗(yàn)室常見的種類有:口腔支原體、豬鼻支原體、發(fā)酵支原體、人型支原體、唾液支原體、肺支原體和梨支原體等。




注:支原體的形態(tài)和特點(diǎn)(來源:www.yeasen.com/news/detail/121)






細(xì)胞株一旦感染支原體后,培養(yǎng)基通常不會(huì)有顏色變化。支原體附著在細(xì)胞株表面,通過搶奪細(xì)胞培養(yǎng)基中的養(yǎng)分實(shí)現(xiàn)增殖。在其繁殖的過程中除了消耗培養(yǎng)基中的各種養(yǎng)分,同時(shí)還會(huì)改變培養(yǎng)基中的pH值,甚至產(chǎn)生對(duì)細(xì)胞株有毒害的代謝產(chǎn)物,從而導(dǎo)致細(xì)胞狀態(tài)的改變。


支原體污染后雖然不會(huì)致使細(xì)胞株馬上死亡,但會(huì)影響細(xì)胞內(nèi)的各種參數(shù),如改變細(xì)胞膜抗原性、細(xì)胞新陳代謝、干擾核酸的合成、改變 DNA 轉(zhuǎn)染效率,導(dǎo)致染色體畸變等,在多方面產(chǎn)生深遠(yuǎn)的影響,嚴(yán)重影響培養(yǎng)細(xì)胞各項(xiàng)參數(shù)的準(zhǔn)確度。


注:受支原體污染后細(xì)胞出現(xiàn)的相關(guān)狀態(tài)的改變(來源:www.yeasen.com/news/detail/121)








支原體污染的潛在途徑包括:



·?受污染的培養(yǎng)基、試劑或儀器,包括了無菌試劑和材料、層流超凈工作臺(tái)、恒溫恒濕培養(yǎng)箱、水浴鍋和冰箱等。



·?實(shí)驗(yàn)室人員(約?80.6 %的技術(shù)人員為支原體攜帶者)



·?其他實(shí)驗(yàn)室的被感染培養(yǎng)物





實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)條下被多種支原體同時(shí)污染的情況屢見不鮮,這是一個(gè)讓大多數(shù)實(shí)驗(yàn)室都十分頭痛的問題。保持無菌狀態(tài),無論對(duì)于新手亦或是老手,都是一個(gè)巨大的挑戰(zhàn)。體外培養(yǎng)的細(xì)胞缺乏免疫系統(tǒng),因此,控制污染的方式是預(yù)防污染!

細(xì)胞實(shí)驗(yàn)室傳統(tǒng)的消毒流程是


1.?用消毒酒精擦拭臺(tái)面;


2.?打開超凈工作臺(tái)和細(xì)胞房的紫外燈,照射1~2h。


值得注意的是,紫外燈開啟后,人不能進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室內(nèi),紫外線對(duì)眼睛和裸露的皮膚均有危害。若要進(jìn)入,操作人員一定要先關(guān)閉紫外燈,待人離開后再重新打開。




面對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室苛刻的設(shè)備損耗條件,歐菲姆擁有優(yōu)秀的材料兼容性。對(duì)玻璃、不銹鋼、環(huán)氧樹脂等實(shí)驗(yàn)室常見材料腐蝕性小,是細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室清潔消毒的更好選擇!?





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