1.百螢Helixyte Green ssDNA試劑簡介 ? 合成寡核苷酸用于多種分子生物學(xué)技術(shù)，例如 DNA 測序、定點(diǎn)誘變、DNA 擴(kuò)增和原位雜交。測量寡核苷酸和 ssDNA 濃度的常用技術(shù)是測定 260 nm (A260) 處的吸光度。然而，吸光度法受到核酸制劑中常見的各種污染物的極大干擾，包括核苷酸、雙鏈核酸和蛋白質(zhì)。 Helixyte Green ssDNA 定量試劑是定量 ssDNA 和寡核苷酸的絕佳替代品，它的靈敏度和選擇性大大提高。 Helixyte Green ssDNA 試劑是一種帶正電荷的熒光探針，它與 ssDNA 的疏水基團(tuán)結(jié)合，通過疏水力、氫鍵和靜電相互作用的協(xié)同作用形成高度發(fā)光的復(fù)合物。 Helixyte Green ssDNA 試劑具有極低的固有熒光，與 ssDNA 結(jié)合后固有熒光明顯增強(qiáng)。它使研究人員能夠使用標(biāo)準(zhǔn)分光光度計(jì)和熒光素激發(fā)和發(fā)射波長對低至 100 pg/mL 的寡核苷酸或 ssDNA (~500 pg/mL) 進(jìn)行定量。這種靈敏度比吸光度法高出幾個(gè)數(shù)量級?？墒褂脽晒饷笜?biāo)儀檢測低至 1 ng/mL 的寡核苷酸或 ssDNA。 Helixyte Green ssDNA 試劑具有從 100 pg/mL 到 1 μg/mL 的較大線性檢測范圍。 ? 2.百螢Helixyte Green ssDNA試劑參數(shù) Ex(nm)??? ?498 Ex(nm)??? ?519 溶? 劑????DMSO 存儲條件??在-15℃以下保存，避光防潮 ? 3.百螢Helixyte Green ssDNA試劑適用儀器 ? 熒光酶標(biāo)儀 Ex:??????? ?490nm Em:?????? ??525nm Cutoff:???? 515nm 推薦孔板:??純黑色孔板 ? 4.百螢Helixyte Green ssDNA試劑實(shí)驗(yàn)方案 ?

概述

1.添加 100 μL 核酸標(biāo)準(zhǔn)品或測試樣品

2.添加 100 μL Helixyte Green ALL溶液

3.在室溫下孵育 5-10 分鐘

4.檢測Ex/Em=490/525 nm 處的熒光強(qiáng)度

注：以下方案是使用 Helixyte Green ssDNA 定量 ssDNA 的示例。打開前讓所有成分升至室溫。沒有關(guān)于 Helixyte Green ssDNA 染色劑的致突變性或毒性的數(shù)據(jù)。由于該試劑與核酸結(jié)合，因此應(yīng)將其視為潛在的誘變劑并小心處理。應(yīng)特別小心處理 DMSO 原液，因?yàn)橐阎?DMSO 可促進(jìn)有機(jī)分子進(jìn)入組織。

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溶液制備

ssDNA 標(biāo)準(zhǔn)溶液 將 10 uL 100 ug/mL ssDNA 標(biāo)準(zhǔn)溶液（未提供）添加到您選擇的 190 uL 緩沖液中以獲得 5 ug/mL 標(biāo)準(zhǔn)溶液，然后進(jìn)行 1:3 稀釋以獲得連續(xù)稀釋的 ssDNA 標(biāo)準(zhǔn) (SS2-SS7) .請使用AAT Bioquest連續(xù)稀釋計(jì)算器以方便數(shù)據(jù)處理。? Helixyte Green ssDNA 工作溶液

將 100 μL Helixyte Green ssDNA 試劑加入您選擇的 10 mL 緩沖液中，制備 Helixyte? Green ssDNA 工作溶液。 通過用箔紙覆蓋或?qū)⑵渲糜诤诎抵衼肀Ｗo(hù)工作溶液免受光照。

注意：建議在塑料容器而不是玻璃容器中制備工作溶液，因?yàn)槿玖峡赡軙降讲ＡП砻妗?為獲得佳效果，該溶液應(yīng)在稀釋后幾小時(shí)內(nèi)使用。

注意：10 mL 的工作溶液對于一個(gè) 96 孔板就足夠了。

注意：10 mM Tris-HCl (pH 8.0) 和 0.1 mM EDTA 可用于制備工作溶液和標(biāo)準(zhǔn)品。

操作步驟 表 1. ssDNA 標(biāo)準(zhǔn)品和測試樣品在純黑色 96 孔板中的布局。 SS= ssDNA 標(biāo)準(zhǔn)品（SS1 - SS7，1667 至 2.3 ng/mL）； BL=空白控制； TS=測試樣品

表2.各孔試劑組成

1.?根據(jù)表 1和表 2 中提供的布局準(zhǔn)備 ssDNA 標(biāo)準(zhǔn) (NS)、空白對照 (BL) 和測試樣品 (TS)。對于 384 孔板，每孔使用 25 μL 試劑，而不是 100 μL。 2.將 100 μL Helixyte Green ssDNA 工作溶液加入 ssDNA 標(biāo)準(zhǔn)品、空白對照和測試樣品的每個(gè)孔中，使測定體積為 200 μL/孔。 對于 384 孔板，將 25 μL 的 Helixyte Green ssDNA 工作溶液添加到每個(gè)孔中，以獲得 50 μL/孔的總體積。 3.在室溫下避光孵育反應(yīng) 5 到 10 分鐘。 4.使用 Ex/Em = 490/525 nm（Cutoff在 515 nm）處的熒光酶標(biāo)儀檢測熒光增加。 ? 圖示

圖 1. 使用 Helixyte Green ssDNA 試劑在 96 孔黑色實(shí)心板中測量 ssDNA 劑量反應(yīng)。