質粒純化第二彈:無內毒素質粒提取方法大全
研究背景:
內毒素是革蘭氏陰性細菌細胞壁中的一種成分,叫做脂多糖。內毒素只有當細菌死亡溶解或用人工方法破壞菌細胞后才釋放出來。內毒素脂多糖分子由菌體特異性多糖、非特異性核心多糖和脂質 A 三部分構成。脂質 A 是內毒素的主要毒性組分。不同革蘭氏陰性細菌的脂質 A 結構基本相似。內毒素對于細胞的生存有影響,特別是進行轉染時,會影響轉染效率。
來自QIAGEN的EndoFree Plasmid Kits為公認的市面上內毒素含量最低的質粒純化試劑盒,一起來康康吧!
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EndoFree Plasmid Kits — 超轉染級質粒制備
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整合在孵育步驟的 EndoFree? Buffer 內毒素去除液將內毒素水平降低到低于 0.1 EU/μg DNA。所有的蛋白質,RNA 成分和其他雜質成分都被陰離子交換樹脂柱去除。

圖注:內毒素對于轉染效率的影響。不同的轉染方法進行轉染,但仍可清晰看到在很低的內毒素范圍內,轉染效率即受到很大影響。
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選擇指南

轉染級純度質粒 DNA
QIAGEN 陰離子交換樹脂提供轉染級純度 DNA,相當于 2 倍氯化銫梯度離心制備純度。獲得的質 粒 DNA 適合各種實驗室應用如大多數(shù)細胞的轉染和較大難度的酶反應。
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QIAGEN Plasmid plus Kit — 最快的質粒純化試劑盒
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利用真空方式超快速進行質粒純化,20 分鐘內可純化 24 個樣本。堿裂解步驟后,利用 QIAfilter 無須離心即可澄清裂解液,然后離心柱安置于真空底座上進行 DNA 的結合和洗滌步驟,并用離心機收集最終的質粒 DNA。
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QIAGEN Plasmid plus Kit 獲得的質粒內毒素水平在 0.1-1 EU/μg
DNA。原因在于:1. 獨特的內毒素去除溶液(ETR buffer for Midi/Maxi Kit、CPW buffer for Mega/Giga Kit)。2. 增加了一步洗滌步驟 。低內毒素水平甚至可以適合某些敏感細胞的轉染。

選擇指南:

QIAGEN Plasmid Kit — 規(guī)格最全的質粒純化試劑盒
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