3-25號(hào)答疑——加標(biāo)回收是怎么弄的?怎么計(jì)算?
回收率是用來(lái)干嘛的?
驗(yàn)證方法的準(zhǔn)確度
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具體操作
1.選擇加標(biāo)的濃度
如何選擇加標(biāo)的濃度?
一般是1倍定量限,3倍定量限,10倍定量限。
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什么是定量限?什么是準(zhǔn)確度?
嗯,這些都是基本概念自己去查資料。看完了實(shí)在是不理解,這時(shí)候?qū)で髱椭庞幸饬x。
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2.每個(gè)加標(biāo)濃度做3個(gè)平行,要求高的實(shí)驗(yàn)做6個(gè)(即n=6)我們按3個(gè)來(lái)講。
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3.稱(chēng)樣12個(gè)樣品。樣品是隨便選嗎?這個(gè)問(wèn)題很難。如果不想太麻煩的話(huà),就選沒(méi)有待測(cè)物的樣品。有待測(cè)物也沒(méi)有關(guān)系,盡量不要比加標(biāo)濃度高太多。
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空白3個(gè)、第一個(gè)加標(biāo)濃度3個(gè),第二個(gè)加標(biāo)濃度3個(gè),第三個(gè)加標(biāo)濃度3個(gè)
總共12個(gè)
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4.空白不加(后面的步驟是按前處理方法做)
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后面的9個(gè),計(jì)算好要加入的標(biāo)液的量,然后加入標(biāo)液到樣品中,(后面的步驟和空白的處理方法一樣。)
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以下我們默認(rèn)樣品是沒(méi)有待測(cè)物的。
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加入多少體積的標(biāo)液,和你用多大濃度的標(biāo)液加有關(guān)。第一種情況,比如你要加1mg/kg ,然后你的標(biāo)準(zhǔn)是1mg/ml,我們需要知道什么呢?我們需要知道稱(chēng)了幾克樣
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舉例:稱(chēng)樣品5g,提取之后,提取液定容到50 ml,取10ml提取液進(jìn)行操作,最后定容到1ml ,然后上機(jī)測(cè)定。
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那么要加多少呢?
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這樣計(jì)算,首先1mg/kg我們進(jìn)行單位換算,就是1μg/g,我們稱(chēng)了5g ,也就是說(shuō)我們要加5μg進(jìn)去。
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標(biāo)液濃度是1mg/ml,單位換算之后就是,1000μg/ml,我們要求的是體積,即加入多少毫升(或者微升),體積=質(zhì)量÷濃度。代入進(jìn)去就是0.005 ml 即5μl
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公式的運(yùn)用前是,最好將所有的單位都換算稱(chēng)同一個(gè)級(jí)別的。不然很容易算錯(cuò)單位。
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萬(wàn)能公式:加入的體積=加標(biāo)濃度×稱(chēng)樣量÷標(biāo)液的濃度
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第二種情況,假如你要加標(biāo)的濃度是5μg/ml,這里的5μg/ml指的是我們上機(jī)測(cè)定后,標(biāo)曲去計(jì)算得出的值,也就是說(shuō)我們要加到這個(gè)數(shù)值,這種情況我們要怎么算呢?
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舉例:稱(chēng)樣品5 g,提取之后,提取液定容到50 ml,取10 ml提取液進(jìn)行操作,最后定容到1ml ,然后上機(jī)測(cè)定。
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這種情況就要逆推了。逆推出來(lái)原來(lái)的樣品含量應(yīng)該是多少?
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直接就用5μg/ml×定容體積1ml,就是5μg,10ml里有5μg,那么50 ml有25μg,也就是說(shuō)我們要加25μg的待測(cè)物進(jìn)去。
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同理
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標(biāo)液濃度是1mg/ml,單位換算之后就是,1000μg/ml,我們要求的是體積,即加入多少毫升(或者微升),體積=質(zhì)量÷濃度。帶入進(jìn)去就是0.025ml 即25μl
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5.上機(jī)
理論值
第一種情況:我們稱(chēng)樣量為5g,提取之后5μg的待測(cè)物就會(huì)均勻的分散到50ml里,那么取的10ml里會(huì)有1μg,最后定容到1ml,那么上機(jī)測(cè)出來(lái)的結(jié)果就應(yīng)該是1μg/ml
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第二種情況: 理論值就是5μg/ml
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回收率=實(shí)測(cè)值÷理論值×100%
(如果你選用的樣品含有待測(cè)物,那么你必須用實(shí)測(cè)值減去空白值再去除于理論值)