一.實驗目的

1.了解特殊顯微鏡的構(gòu)造原理，2.熟練掌握特殊顯微鏡的使用

二.實驗材料

光學顯微鏡、相差顯微鏡、倒置顯微鏡、體視顯微鏡、暗視野顯微鏡、蓋玻片、載玻片、洋蔥、碘液

三.實驗原理

1.光學顯微鏡:是利用光學原理，把人眼所不能分辨的微小物體放大成像，以供人們提取微細結(jié)構(gòu)信息的光學儀器。顯微鏡是一 種精密的光學儀器 ，已有300多年的發(fā)展史。自從有 了顯微鏡，人們看到了過去看不到的許多微小生物和構(gòu)成生物的基本單元細胞中

2.相差顯微鏡:相差顯微鏡是荷蘭科學家Zernike于1935年發(fā)明的，用于觀察未染色標本的顯微鏡?；罴毎臀慈旧纳?物標本，因細胞各部細微結(jié)構(gòu)的折射率和厚度的不同，光波通過時，波長和振幅并不發(fā)生變化，僅相位發(fā)生變化(振幅差)，這種振幅差 人眼無法觀察。而相差顯微鏡通過改變這種相位差，并利用光的街射和干涉現(xiàn)象，把相差變?yōu)檎穹顏碛^察活細胞和未染色的標本。相差顯微鏡和普通顯微鏡的區(qū)別是:用環(huán)狀光鬧代替可變光鬧，用帶相板的物鏡代替普通物鏡，并帶有一個合軸用的望遠鏡。

3.倒置顯微鏡:倒置顯微鏡工作原理的詳解倒置顯微鏡的組成和普通顯微鏡樣， 只不過物鏡與照明系統(tǒng)顛倒，前者在載物臺之下，后者在載物臺之上，用于觀察培養(yǎng)的活細胞，具有相差物鏡。倒置 顯微鏡工作時當同一種光通過細胞時，由于細胞不同部分對光的折射率不同，通過細胞的光線和未通過細胞的光線便可以產(chǎn)生相位差。

4.暗視野顯微鏡:暗視野顯微鏡的基本原理是丁達爾效應。暗視野顯微鏡在普通的光學顯微鏡上安裝暗視野聚光鏡后,由于該聚光器內(nèi)部拋物面結(jié)構(gòu)的遮擋,照射在待檢物體表面的光線不能直接進入物鏡和目鏡,僅散射光能通過,因而視野是黑暗的。暗視野顯微鏡由于不將透明光射入直接觀察系統(tǒng)，無物體時，視野暗黑，不可能觀察到任何物體;當有物體時，以物體街射回的光與散射光等在暗的背景中明亮可見。在暗視野觀察物體，照明光大部分被折回，由于物體(標本)所在的位置結(jié)構(gòu)，厚度不同，光的散射性，折光等都有很大的變化。暗視野顯微鏡基本結(jié)構(gòu)是將普通顯微鏡光學組加上擋光片

5.體視顯微鏡原理:體視顯微鏡結(jié)構(gòu)是由一個共用的初級物鏡，對物體成像后的兩個光束被兩組中間物鏡亦稱變焦鏡分開，并組成一定的角度稱為體視角般為12° -15° ， 再經(jīng)各自的目鏡成像，它的倍率變化是由改變中間鏡組之間的距離而獲得，利用雙通道光路,雙目鏡筒中的左右兩光束不是平行，而是具有一定的夾角，為左右兩眼提供一個具有立體感的圖像。它實質(zhì)上是兩個單鏡簡顯微鏡并列放置，兩個鏡筒的光軸構(gòu)成相當于人們用雙目觀察一個 物體時所形成的視角，以此形成三維空間的立體視覺圖像

四.實驗步驟

1.制片并觀察(洋蔥內(nèi)表皮細胞)?

2.使用暗視野顯微鏡觀察洋蔥內(nèi)表皮細胞

3.使用相差顯微鏡、體視顯微鏡、倒置顯微鏡觀察線蟲

五.注意事項

1.正確使用顯微鏡:?

①取得最佳圖像

a.調(diào)節(jié)瞳距，令視野合二為一

b.左右眼視力不可調(diào)近視度

c聚光器數(shù)值孔徑大小與物鏡信數(shù)一致

d.聚光器遵循低倍鏡調(diào)低，高倍鏡調(diào)高

e.光源亮度遵循低信調(diào)低，高倍物鏡調(diào)高

②使用顯微鏡的習慣:?

a打開電源后慢慢調(diào)亮燈泡，調(diào)到最亮后關(guān)閉電源

b.觀察切片時候從低倍鏡到高倍鏡切換

c.觀察結(jié)束后，載物臺轉(zhuǎn)至最低

d.用完顯微鏡，物鏡要調(diào)成"八字”

e.光源調(diào)至最暗后關(guān)閉顯微鏡光源。

③使用故障維修:?

a.載物臺下滑調(diào)緊調(diào)節(jié)器

b.圖像不清晰，使用乙醚乙醇鏡頭清洗液擦拭鏡頭

c看到玻璃片調(diào)低聚光器高度。

d.燈源不亮不需要換燈泡

e.成像背景為黃色，在聚光器上放置藍色濾光片

六.實驗結(jié)果與討論心

1.繪制洋蔥表皮細胞圖(請寫出圖例，注明放大倍數(shù)，并做好標注! )?