怎么知道蛋白的分子量
蛋白質(zhì)分子質(zhì)量或稱蛋白質(zhì)相對(duì)分子質(zhì)量,是指蛋白質(zhì)所含的各原子的相對(duì)分子質(zhì)量之和,是蛋白質(zhì)的重要理化參數(shù),也是蛋白質(zhì)鑒定必不可少的內(nèi)容。如果想知道蛋白的分子質(zhì)量,就要對(duì)其進(jìn)行測定,那么測定蛋白質(zhì)的分子質(zhì)量的方法有哪些呢?
隨著生命科學(xué)的發(fā)展進(jìn)步,衍生了很多蛋白質(zhì)分子量的測定方法,如化學(xué)法、滲透壓法、凝膠色譜法、聚丙烯凝膠電泳法、沉降法、光散射法以及質(zhì)譜法等,其中凝膠滲透色譜法(GPC)和基于質(zhì)譜的方法是鑒定蛋白質(zhì)分子質(zhì)量最常用的方法。
凝膠滲透色譜主要利用凝膠色譜柱將大小、體積不同的蛋白質(zhì)分子進(jìn)行分離,并依次進(jìn)入濃度檢測器進(jìn)行分析,可得到蛋白體積(Ve)與蛋白濃度的凝膠色譜圖,再借助GPC校正曲線可以將Ve轉(zhuǎn)換成相對(duì)分子質(zhì)量M,從而實(shí)現(xiàn)蛋白混合物中各組分的相對(duì)分子質(zhì)量鑒定。
質(zhì)譜法主要利用電噴霧離子化質(zhì)譜(ESI)和基質(zhì)輔助激光解吸電離質(zhì)譜(MALDI)進(jìn)行蛋白分子量分析。質(zhì)譜法相比其他方法存在明顯的優(yōu)勢,只需要少量的蛋白樣品即可檢測,且檢測結(jié)果分辨率和準(zhǔn)確性更高,能測量的分子量范圍更廣,因此更適合復(fù)雜蛋白混合物的相對(duì)分子質(zhì)量分析。
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