1.?取30mg組織放入勻漿管（內(nèi)置磁珠）中，加入1ml Trizol，用勻漿器進(jìn)行3次組織勻漿，每次15s。最后檢查管內(nèi)是否還有大的組織塊，若有則繼續(xù)勻漿，直至無肉眼可見的組織塊。

2.?最大轉(zhuǎn)速瞬離勻漿管。將溶液吸入到新的EP管中，室溫放置5min。

3.?加入0.2ml 氯仿，劇烈混勻，溶液呈現(xiàn)乳狀，室溫靜置5min，4℃ 12000g離心15min。

4.?吸取上層水相于新的EP管中（注意不要吸到中間層，一般1ml Trizol可以吸到400-500ul液體）。加入1.5倍體積的異丙醇（600ul），上下顛倒混勻，室溫靜置10min，4℃ 12000g離心10min。

5.?棄上清，注意不要棄去RNA白色沉淀，加入1ml 75%乙醇（用DEPC水配）洗滌，上下翻轉(zhuǎn)使RNA沉淀浮起，4℃ 7500g離心5min。

6.?棄上清，注意不要棄去RNA白色沉淀，加入1ml 75%乙醇（用DEPC水配）洗滌，上下翻轉(zhuǎn)使RNA沉淀浮起，EP管按相反方向放入離心機(jī)，4℃ 7500g離心5min。

7.?棄上清，注意不要棄去RNA白色沉淀，4℃ 7500g離心1min，200ul槍頭吸去殘留液體。

8.?室溫晾干5-10min。

9.?加入30ul DEPC水溶解RNA。

10.?NanoDrop測(cè)濃度，放置于-80℃冰箱保存或直接進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄。

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二、RNA濃度測(cè)度及反轉(zhuǎn)錄

(試劑盒PrimeScript RT Master Mix ，TAKARA，RR036A)

1.???Nanodrop測(cè)RNA濃度，用于進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄。

2.???體系配制：1000ng RNA，4ul 5× RT Master mix，RNase free water補(bǔ)足到20ul

3.???混勻后放入PCR儀反應(yīng)，條件如下：37℃, 30min → 85℃, 1min → 4℃, ∞

4．ddH2O將反轉(zhuǎn)錄后的cDNA稀釋到2.5 ng/ul，-80℃保存。

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