缺血性急性腎衰竭動物模型【北京實(shí)驗外包】

【造模機(jī)制】切除右腎并夾閉左腎動脈,造成腎缺血性線粒體功能障礙,ATP 不能利用,依次降解產(chǎn)生大量次黃嘌呤;缺氧條件下次黃嘌呤不能代謝為黃嘌呤而大量堆積;一-且血流再灌注,次黃嘌呤代謝為嘌呤并進(jìn)一步代謝為尿酸,并產(chǎn)生大量超氧陰離子,再進(jìn)一步產(chǎn)生羥自由基和 H.G.,通過膜的脂質(zhì)過氧化對腎臟造成損害,導(dǎo)致細(xì)胞壞死和臟器功能減退。

【造模方法】

1.動物和分組選擇 10 ~12 周齡雄性 SD 大鼠(清潔級)20 只,體重180～220g,隨機(jī)分為 ARF 組和假手術(shù)組。分籠喂養(yǎng)于清潔級動物飼養(yǎng)環(huán)境中,標(biāo)準(zhǔn)飼料,自由飲水。

2.模型制備 ARF模型制作方法:以戊巴比妥鈉(40mg/ke)腹腔注射麻醉大鼠,使大鼠仰臥位固定于手術(shù)臺上,腹部去毛后以苯扎溴銨(新潔爾滅)局部消毒,沿腹正中線縱向切口打開腹腔,先暴露右腎,在顯微鏡下分離出右腎蒂及右輸尿管,以 1-0 絲線分別結(jié)扎整個腎蒂和右輸尿管并取下右腎;暴露左腎并分離出左腎蒂,用無創(chuàng)傷性夾錯夾閉腎蒂 60 分鐘后,松夾恢復(fù)腎灌注,此時腎臟顏色先由鮮紅色轉(zhuǎn)為蒼白或暗紅色,再變成鮮紅色,表明再灌注成功;觀察術(shù)野無出血和滲血后逐層縫合關(guān)閉腹腔。假手術(shù)組麻醉、打開腹腔等方式均同上,暴露左右兩腎后鈍性分離腎包膜即可。

3.樣本采集和指標(biāo)測定腎功能檢測：2 組分別在第 1.6.12.24.36 小時采集尾靜脈血測定血清尿素氮(BUN),肌酐(Cr)濃度。形態(tài)學(xué)觀察:手術(shù)后 36 小時以戊巴比妥鈉(4mg/kg)腹腔注射麻醉大鼠,取下殘腎置入 4%中性甲醛溶液固定 24 小時后梯度酒精脫水,二甲苯透明、浸蠟、包埋、連續(xù)切片(切片厚約 3μm),HE 染色。

【模型特點(diǎn)】

1.腎功能變化造模鼠血 Cr和 BUN 濃度在 6 小時后開始顯著上升,分別為(16.19+2.14)mmol/L 和(114.35±3.02)μmol/L,并于 24 小時達(dá)高峰,分別為(79.32±2.54)mmol/L和(296.65±2.22)μmol/L,以后逐漸下降,提示急性腎衰竭動物模型建立成功,再灌注確切。

2.形態(tài)學(xué)改變假手術(shù)組光鏡下基本正常。ARF 組腎小球無明顯異常；近曲小管上皮細(xì)胞出現(xiàn)崩解,壞死、脫落,管腔內(nèi)可見細(xì)胞碎片及管型,管腔擴(kuò)張,遠(yuǎn)端小管內(nèi)形成大量蛋白、壞死脫落細(xì)胞形成細(xì)胞管型,組織結(jié)構(gòu)松散,尿液外滲。腎小管管型程度和損傷程度指數(shù)明顯升高(P<0.01)。

【應(yīng)用范圍】主要用于研究急性腎衰竭發(fā)病機(jī)制和氧自由基清除劑對急性腎衰竭的防治作用。

【注意事項】

1.夾閉左腎腎蒂的時間必須達(dá)到 60 分鐘,再行再灌注。

2.由于急性腎衰竭在數(shù)小時到幾天以內(nèi)發(fā)生的急劇變化,因此采樣時間應(yīng)設(shè)計在造模后 1～36 小時之間。

【模型評估】急性腎衰竭動物模型的建立方法較多,主要有兩大類:缺血性急性腎衰竭模型和腎毒性急性腎衰竭模型。采用切除大鼠右腎并夾閉左腎動脈方法建立的缺血性ARF 具有簡便有效,成功率高的優(yōu)點(diǎn),而且腎功能和腎小管等形態(tài)學(xué)病理改變典型,穩(wěn)定,主要用來研究 ARF 發(fā)病機(jī)制和氧自由基清除劑對 ARF 的防治作用。

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