細(xì)菌的接種方法有很多種，如劃線法、涂布法、傾注法、斜面接種法、液體培養(yǎng)基接種法、螺旋接種法等，其方法和應(yīng)用各有不同，小助手將一一解釋，以幫助實(shí)驗(yàn)人員選擇操作。

一、劃線法

用途：主要用于菌種分純，獲得單菌落。

實(shí)驗(yàn)步驟：由接種環(huán)沾取少許待分離的材料，在無菌平板表面進(jìn)行平行劃線、扇形劃線或其他形式的連續(xù)劃線（詳見圖1），微生物細(xì)胞數(shù)量將隨著劃線次數(shù)的增加而減少，并逐步分散開來，如果劃線適宜的話，微生物能一一分散，經(jīng)培養(yǎng)后，可在平板表面得到單菌落。

優(yōu)點(diǎn)：可以觀察菌落特征，對(duì)混合菌進(jìn)行分離。

缺點(diǎn)：不能用于菌落計(jì)數(shù)。

圖1 常見的5種劃線方法

二、涂布法

用途：主要用于菌落總數(shù)計(jì)數(shù)。

實(shí)驗(yàn)步驟：先將培養(yǎng)基熔化后趁熱倒入無菌平板中，然后用無菌吸管吸取0.1ml菌液接種在已凝固的瓊脂平板上。再用無菌玻璃棒將菌液在平板上涂抹均勻,將涂抹好的平板平放于桌上20~30min使菌液滲透入培養(yǎng)基內(nèi)，然后將平板倒轉(zhuǎn)，保溫培養(yǎng)，至長(zhǎng)出菌落后即可計(jì)數(shù)。

小助手最近將幽門螺旋桿菌進(jìn)行涂布，詳見下方視頻。

優(yōu)點(diǎn)：可以計(jì)數(shù)，可以觀察菌落特征。

缺點(diǎn)：接種前需梯度稀釋，吸收量較少，較麻煩，平板不干燥效果不好，容易蔓延。

三、傾倒法

用途：主要用于菌落總數(shù)的計(jì)數(shù)。

實(shí)驗(yàn)步驟：吸取1ml菌液加入平板中，倒入已融化并冷卻至45~50℃的細(xì)菌培養(yǎng)基，輕輕轉(zhuǎn)動(dòng)平使菌液與培養(yǎng)基混合均勻，冷凝后倒置，適溫培養(yǎng)。至長(zhǎng)出菌落后即可計(jì)數(shù)。

優(yōu)點(diǎn)：可以計(jì)數(shù)，較方便。

缺點(diǎn)：接種前需梯度稀釋，不能觀察菌落特征，不適用于嚴(yán)格好氧菌和熱敏感菌。

四、斜面接種法

用途：主要用于保存菌種，或觀察細(xì)菌的某些生化特性和動(dòng)力。

實(shí)驗(yàn)步驟：用接種環(huán)或接種針伸入菌種管內(nèi)，挑取用來移種的菌落。伸入斜面培養(yǎng)管內(nèi)，先從斜面底部到頂端拖一條接種線，再自下而上蜿蜒劃線，或直接自下而上地蜿蜒劃線。接種完成之后，用火焰滅菌培養(yǎng)管口，并塞上棉塞，置于37℃培養(yǎng)（詳見圖2）。

圖2 斜面接種法

五、液體培養(yǎng)基接種法

用途：主要用于菌液比濁實(shí)驗(yàn)。

實(shí)驗(yàn)步驟：用滅菌接種環(huán)挑取菌落或標(biāo)本，在試管內(nèi)壁與液面交界處輕輕研磨，使細(xì)菌均勻得散落在液體培養(yǎng)基中。

六、螺旋接種法

用途：此法主要用于菌落總數(shù)計(jì)數(shù)。

Spiral plater 可以在無任何全部或中間稀釋的情況下快速細(xì)菌接種。對(duì)數(shù)減少的樣品容量以阿基米德螺旋線的形式被自動(dòng)分注在旋轉(zhuǎn)式培養(yǎng)基表面。培養(yǎng)基上每一點(diǎn)的容量可以被知曉和校準(zhǔn)。菌液的濃度可以通過培養(yǎng)皿上一定區(qū)域的菌落數(shù)量除以同區(qū)域樣品分注量來計(jì)算。

優(yōu)點(diǎn)：螺旋接種法菌液無需稀釋(其他接種方法均需經(jīng)過梯度稀釋才能計(jì)菌落數(shù))，自動(dòng)化接種，效率高，可節(jié)省3/4的耗材和時(shí)間。

缺點(diǎn)：產(chǎn)品成本高，適用于樣品量比較大的實(shí)驗(yàn)