Image J功能非常強(qiáng)大，大家可以看前幾期對(duì)的介紹，今天帶你解鎖老司機(jī)必會(huì)的Image J實(shí)用技巧，下面是針對(duì)螢光圖片的五個(gè)使用技巧。廢話不多說看下方介紹。

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一、如何拆分與Merge多通道熒光圖片：

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File->Open->分別打開Red，Green， Blue三個(gè)通道的圖片：

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Image -> Color -> Merge Channels可以Merge熒光圖片。

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二、圖片與像素值互換：

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圖片由許多像素點(diǎn)（Pixel）組成，每個(gè)像素點(diǎn)對(duì)應(yīng)有不同的像素值（Pixel values），如下圖所示：

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方法為：

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Image?J打開圖片：

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Image菜單下，Transform，Image toresults，得到了對(duì)應(yīng)每個(gè)像素點(diǎn)的像素值：

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同樣在Image菜單下，Transform，Results toimage可以把像素值的表格轉(zhuǎn)換為圖片。

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三、熒光核漿比分析：

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步驟：

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ImageJ打開分析圖片：

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Image -> Color -> Split Channels拆分RGB通道

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得到RGB三通道（此時(shí)R、G、B通道均為8-bit圖片）：?

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也可以使用Image-> Color -> Merge Channels將已拆分通道合并：

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圖中兩個(gè)細(xì)胞有連接，以左邊入核明顯細(xì)胞為例。首先使用

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不規(guī)則選框?qū)⒆筮吋?xì)胞框選中：

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Analyze->Tools->ROI manager（感興趣區(qū)管理器），點(diǎn)擊Add：

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選擇需要測(cè)量的參數(shù)：在ImageJ軟件Analyze下選擇Set Measurements設(shè)置測(cè)量參數(shù)，選擇Integrated density，Area，Limit to threshold（Image -> Adjust -> Threshold 調(diào)節(jié)閾值，紅色代表選中，選擇Limitto threshold只計(jì)算紅色選擇的面積），點(diǎn)擊OK。

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Image -> Adjust -> Threshold 調(diào)節(jié)閾值，選擇所有陽性信號(hào)（紅色代表選中）：

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Analyze，Measure，得到結(jié)果：

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黃色ROI中的紅色的灰度值總和為177096，黃色中的紅色占黃色面積的51%。

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如果不加黃色ROI，進(jìn)行同等條件的測(cè)量：

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得到的結(jié)果不僅僅只有左邊這個(gè)細(xì)胞，其灰度值總和為254633，大于177096，紅色占整張圖片的面積百分比為14.9%，遠(yuǎn)遠(yuǎn)小于51%。

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此時(shí)我們已經(jīng)得到單個(gè)細(xì)胞總的熒光強(qiáng)度（灰度值）A=177096。接下來需要計(jì)算核內(nèi)的熒光強(qiáng)度B，用總的熒光強(qiáng)度A-B得到胞漿熒光強(qiáng)度C。

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對(duì)細(xì)胞核圖片同樣進(jìn)行Image -> Adjust-> Threshold 調(diào)節(jié)閾值，選擇所有陽性信號(hào)：

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Analyze-> Analyze particles分析粒子得到的結(jié)果添加到ROI：

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ROI-3是我們需要分析的細(xì)胞核，在上述已經(jīng)閾值選定的綠色熒光通道中點(diǎn)擊ROI-3可在圖中顯示細(xì)胞核輪廓，Analyze，Measure（快捷鍵Ctrl+M），得到核內(nèi)的熒光強(qiáng)度B：

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核漿比=B/(A-B)=98684/(177096-98684)=1.26。

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四、熒光圖片加偽彩：

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加偽彩是對(duì)灰度圖片而言。Lookup tables（LUT）根據(jù)像素點(diǎn)不同的像素值顯示為不同的顏色，即為偽彩，如下圖所示：

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打開灰度圖片或者將RGB通道圖片拆分為對(duì)應(yīng)通道的灰度圖片，在Image菜單下選擇Lookup tables（Fire）：

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有多種LUT可供選擇，在Image，Color下點(diǎn)擊ShowLUT：

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在Analyze下點(diǎn)擊Tools，選擇Calibration Bar，即可給偽彩圖片添加Bar（顯示不同顏色所對(duì)應(yīng)的灰度值）：

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五、調(diào)整熒光顯示效果：

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打開兩通道層掃共聚焦熒光圖片如下：

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目前看起來效果并不好如何進(jìn)行調(diào)整？

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步驟：

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1. Image -> Color -> Split Channels拆分RGB通道：

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1. Process，Enhance Contrat，選擇Normalize與Process all 9 slices：

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得到如下效果：

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3.Image，Stacks，Z projection，選擇Max Intensity：

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得到可以顯示不同層面的最大強(qiáng)大的熒光圖片，效果如下：

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4.Merge熒光圖片

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Image，Stacks，3D projection：

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得到沿著Y軸旋轉(zhuǎn)的動(dòng)圖：

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Save as，Gif，保存為動(dòng)圖展示：

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今天分享的Image J實(shí)用技巧，希望對(duì)大家有所幫助！更多相關(guān)Image J實(shí)用技巧大家可以留言給我們，一起學(xué)習(xí)進(jìn)步。