Leadmium green AM dye 提供了一種特異性熒光探針，能夠以高靈敏度特異性測(cè)量細(xì)胞內(nèi)鉛和鎘水平。Leadmium green AM 指示劑專為檢測(cè)活細(xì)胞中的這些有毒環(huán)境污染物而設(shè)計(jì)。

Leadmium green AM dye產(chǎn)品特點(diǎn)：
※ 用于細(xì)胞內(nèi)鉛和鎘含量測(cè)量的高度特異性指示劑
※ 靈活的形式允許用于多種檢測(cè)方式—流式細(xì)胞分析、熒光顯微鏡成像以及微孔板讀數(shù)儀
※ 明亮的熒光和對(duì)鈣的高分辨力，可檢測(cè)出納摩爾水平的鉛和微摩爾水平的鎘
※ 采用 488 nm 激光線輕松激發(fā)
※ ?Leadmium green AM 易于加載，在酯酶切割乙酰氧基甲基基團(tuán)后能很好地保留在細(xì)胞內(nèi)。

實(shí)驗(yàn)試劑準(zhǔn)備
1 從冰箱內(nèi)取出一管Leadmium Green AM dye（50 μg），讓其回溫到室溫，避光保存。
2 往管子內(nèi)加入50μl 高質(zhì)量無水的DMSO，避光混勻，使其充分溶解。
3 用生理鹽水按照1：10的比例將Leadmium Green AM dye的DMSO儲(chǔ)存液稀釋成工作液（比如取20μl 儲(chǔ)存液加到180μl生理鹽水，混勻），所有溶液制備過程一直避光。
4 37℃溫育生理鹽水，用于后續(xù)多個(gè)步驟的清洗過程。
5 【可選】如果此實(shí)驗(yàn)需要設(shè)置相對(duì)對(duì)照（用一定濃度的PbCl2處理細(xì)胞），建議PbCl2的起始濃度范圍是1nM-625nM。制備625nM PbCl2【添加250μl 10μM PbCl2到3.75ml生理鹽水。然后做9次連續(xù)性梯度稀釋最終得到1nM PbCl2】。37℃保存這些溶液直到需要。每個(gè)濃度需要1ml量。
6 【可選】如果此實(shí)驗(yàn)需要設(shè)置相對(duì)對(duì)照（用一定濃度的CdCl2處理細(xì)胞），建議CdCl2的起始濃度范圍是1μM-250μM。制備250μM CdCl2【添加1ml 1mM CdCl2到3ml生理鹽水。然后做8次連續(xù)性梯度稀釋最終得到1μM CdCl2】。37℃保存這些溶液直到需要。每個(gè)濃度需要1ml量。
7 【可選】制備10mM TPEN工作液，通過添加1.2ml無水乙醇到5mg TPEN?；靹颍覝乇４?。

圖1.Jurkat細(xì)胞系中Leadmium Green AM dye染料的背景熒光。鹽水中的細(xì)胞加載Leadmium Green AM dye并洗滌。使用488 nm激發(fā)和525/10 nm帶通濾光片收集單色熒光。由于細(xì)胞中不存在細(xì)胞內(nèi)鉛或鎘，因此該直方圖表示Leadmium Green AM dye提供的背景熒光。

圖2.Jurkat細(xì)胞系中含有PbCl2的Jurkat細(xì)胞的熒光。鹽水中的細(xì)胞上樣Leadmium Green AM dye并洗滌，然后在1μM PbCl 2鹽水和1μM離粒霉素存在下孵育。使用488 nm激發(fā)和525/10 nm帶通濾光片收集單色熒光。直方圖顯示細(xì)胞內(nèi)鉛陽性。