Graves 病動物模型【實驗代做】

【造模機制】Graves 病又稱毒性彌漫性甲狀腺腫或 Basedow 病,是一種器官特異性自身免疫性疾病,在環(huán)境與遺傳因素的相互作用下,機體免疫系統(tǒng)產(chǎn)生了針對促甲狀服散變體(TSHR)的抗體(TRAb)、TRAb 中的甲狀腺刺激抗體(TSAb)可模擬 TSH 功能,導(dǎo)致甲狀腺激素過度分泌,血中 T 和 T升高。

TSHR是一種糖蛋白激素受體,其經(jīng)分子內(nèi)裂解脫去C肽后,形成位于細(xì)胞表面的A亞單位及穿膜召亞單位,與配體(TSH 和TRAb)結(jié)合的是A亞單位,而非全長TSHR。有研究者證實 TSAb優(yōu)先識別的是 TSHR A 亞單位,本模型的造模機制即用表達(dá) TSH受體A亞單位的重組腺病毒免疫小鼠,誘導(dǎo)產(chǎn)生TRAb,從而導(dǎo)致 Graves病(GD)的發(fā)生。

【造模方法】選用清潔級 BALB/c小鼠,雌性,8~8 周齡,體重 23～~28g,動物飼養(yǎng)于解障環(huán)境中。取已構(gòu)建好的表達(dá) TSH受體 A 亞單位(TSFR289)的重組腺病毒,對照腺病器(Ad-mul)各15×10'U,分別用 PBS 稀釋至 50μl直接經(jīng)脛前肌注射小鼠,每隔 3周免疫1次,共3次。于第3 次免疫后8 周摘眼球取血,檢測血清 TRAb,TT,、TSH;剝離甲狀腺,做組織學(xué)檢查;每隔 2 周記錄一次小鼠體重,觀察體重變化。

【模型特點】

1.經(jīng) Ad-TSHR289 免疫的小鼠有 50%表現(xiàn) TRAb 水平顯著升高,21.4%表現(xiàn)血清TT水平明顯升高。 TT 升高的小鼠 TRAb 水平均顯著升高,伴有血清 TSH 降低,并有不同程度的體重減輕。

2.甲狀腺組織病理切片顯示正常小鼠甲狀腺濾泡大小較一致,細(xì)胞排列比較疏松,上皮細(xì)胞呈低立方狀或扁平狀,濾泡中膠質(zhì)含量比較豐富。經(jīng) Ad-TSHR289 免疫的小鼠有28.6％表現(xiàn)甲狀腺濾泡細(xì)胞增生肥大,呈立方狀或高柱狀,濾泡大小不一,濾泡腔中膠質(zhì)含量減少,在增生的甲狀腺濾泡中有乳頭狀折疊突人濾泡腔,未見淋巴細(xì)胞浸潤。其中TT,升高的小鼠增生尤為明顯,提示高分泌活性。

【應(yīng)用范圍】本模型利用表達(dá) TSHR289 的重組腺病毒免疫 BALB/c 小鼠,制備了Graves 病動物模型,為 Graves 病的發(fā)病機制、治療等進(jìn)一步研究提供了工具。

【注意事項】研究表明不同的免疫方法和注射途徑可產(chǎn)生不同的效果,用表達(dá) TSHRA 亞單位的腺病毒免疫 BALB/c 小鼠,其引起 GD 的發(fā)生率更高。

本模型動物 TRAb 升高水平顯著高于人類 GD,而在 Chen 等的研究中顯示用較弱的抗原刺激將會降低 TRAb 的滴度,并能改變 TSAb 和甲狀腺刺激阻斷型抗體(TSBAb)的平衡,使動物模型特征更接近典型的 GD,故用較低劑量的含目的基因的重組腺病毒免疫將會進(jìn)一步優(yōu)化 GD 動物模型的制備。

【模型評估】目前,在建立 GD 動物模型的探索中,TSHR-腺病毒尤其是 TSHR A 亞單位-腺病毒免疫小鼠的 GD 發(fā)生率高且較穩(wěn)定,是近來采用較多的方法。

本實驗誘導(dǎo)的 GD 動物模型表現(xiàn) TRAb 陽性,伴有血清甲狀腺激素水平升高、TSH水平降低,并出現(xiàn)體重減輕,表明模型在一定程度上模擬了人類 GD,但該模型缺乏人類 GD 常有的眼病表現(xiàn)。

把人類的 TSAb 基因轉(zhuǎn)人小鼠的受精卵中,培育出 TSAb 轉(zhuǎn)基因小鼠。該轉(zhuǎn)基因組小鼠表現(xiàn)血清 FT、升高、TSH 水平下降,伴有基礎(chǔ)體溫升高、體重下降、吸碘率升高和甲狀腺組織增生表現(xiàn)。轉(zhuǎn)基因模型可進(jìn)行傳代,避免了研究過程中需反復(fù)構(gòu)建模型的麻煩,是一個全新的方向。

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