①方法選擇的依據(jù)：土壤中的硼可分成水溶性硼、酸溶性硼和難溶性硼。全硼含量一般不宜用來(lái)判斷土壤對(duì)植物供應(yīng)硼的能力。土壤有效硼用沸水浸出后，常用比色法測(cè)定。比色測(cè)定硼的顯色劑很多，以姜黃素應(yīng)用得最為廣泛。姜黃素與硼的顯色在水溶液蒸干過(guò)程中進(jìn)行；而四羥基葸醌、胭脂紅酸、1，1′日二葸醌亞胺等試劑則只能在濃H2SO4中顯色，試劑溶液的配制、貯存和比色操作都十分不便，對(duì)玻璃器皿也有較高的要求。姜黃素法避免了這些缺點(diǎn)，靈敏度也較高，適用于土壤和植物中硼的測(cè)定。

②方法要點(diǎn)：土樣經(jīng)沸水浸提5分鐘，浸出液中的硼用姜黃素比色法測(cè)定。姜黃素是由姜中提取的黃色色素，以酮型和烯醇型存在，姜黃素不溶于水，但能溶于甲醇、酒精、丙酮和冰醋酸中而呈黃色。在酸性介質(zhì)中與B結(jié)合成玫瑰紅色的絡(luò)合物，即玫瑰花青苷。它是兩個(gè)姜黃素分子和一個(gè)B原子絡(luò)合而成，檢出B的靈敏度是所有比色測(cè)定硼的試劑中最高的（摩爾吸收系數(shù)3=1.80×155），最大吸收峰在550nm處，在比色測(cè)定B時(shí)應(yīng)嚴(yán)格控制顯色條件，以保證玫瑰花青苷的形成。

玫瑰花青苷溶液在0.0014～0.06ppmB的濃度范圍內(nèi)符合Beer定律。溶于酒精后，在室溫下1～2小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定

③主要儀器：石英（或其他無(wú)硼玻璃）；三角瓶（250或300ml）和容量瓶（100ml，1000ml）；回流裝置；離心機(jī)；瓷蒸發(fā)皿（Ф7.5cm）；恒溫水槽；分光光度計(jì)。

④試劑：95％酒精（二級(jí)）；無(wú)水酒精（二級(jí)）；姜黃素——草酸溶液：0.04g姜黃素和5g草酸（H2C2O4·2H2O二級(jí)）溶于無(wú)水酒精中，加入4.2m16NHCl，移入100ml石英容量瓶中，用酒精定容，貯存在陰涼處。姜黃素容易分解，最好當(dāng)天配制。如放在冰箱中，有效期可延長(zhǎng)至3～4天。

B標(biāo)準(zhǔn)系列溶液：0.5716gH3BO3（一級(jí)）溶于水，在石英容量瓶中定容成1升，此為100ppmB標(biāo)準(zhǔn)溶液。再稀釋10倍成為10ppmB標(biāo)準(zhǔn)貯備溶液。吸取10ppmB溶液1.0，2.0，3.0，4.0，5.0ml，用水定容50ml，成為0.2，0.4，0.6，0.8，1.0ppmB的標(biāo)準(zhǔn)系列溶液，貯存在塑料試劑瓶中。

INCaCl2溶液：7.4g CaCl·2H2O（二級(jí)）溶于100ml水中。

⑤操作步驟：待測(cè)液制備稱(chēng)取風(fēng)干土壤（通過(guò)1mm尼龍篩）10.00g到250ml或300ml的石英三角瓶中，加20.0ml無(wú)硼水。連接回流冷凝器后煮沸5分鐘整，立即停火，但繼續(xù)使冷卻水流動(dòng)。稍冷后取下石英三角瓶，放置片刻使之冷卻，倒入離心管中，加2滴INCaCl2溶液以加速澄清（但不要多加），離心分離出清液。

測(cè)定吸取1.00ml清液（含硼不超過(guò)lug），放入瓷蒸發(fā)皿中，加入4ml姜黃素溶液。在55±3℃水浴上蒸發(fā)至干并且繼續(xù)在水浴上烘干15分鐘除去殘存的水分。在蒸發(fā)與烘干過(guò)程中顯出紅色。加20.0m195％酒精溶解，用于濾紙過(guò)濾到1cm直徑比色槽中，在550nm波長(zhǎng)處比色，用酒精調(diào)節(jié)比色計(jì)的O點(diǎn)。假若吸收值過(guò)大，說(shuō)明B濃度過(guò)高，應(yīng)加95％酒精稀釋或改用580或600nm的波長(zhǎng)比色。

工作曲線的繪制分別吸取0.2，0.4，0.6，0.8，1.0ppmB標(biāo)準(zhǔn)系列溶液各1ml，放入瓷蒸發(fā)皿中，加4ml姜黃素溶液，按上述步驟顯色和比色。以B標(biāo)準(zhǔn)系列的濃度（ppm）對(duì)吸收值繪制工作曲線。

⑥結(jié)果計(jì)算：

有效B，ppm=C×液土比

式中C—由工作曲線查得B的ppm數(shù)；

液土比—浸提時(shí)，浸提劑毫升數(shù)/土壤克數(shù)=2。

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①用本法測(cè)定B時(shí)，應(yīng)嚴(yán)格控制顯色條件。姜黃素與B絡(luò)合形成玫瑰花青苷，需要在無(wú)水條件下進(jìn)行。有水殘存會(huì)使絡(luò)合物顏色強(qiáng)度降低。顯色時(shí)的蒸發(fā)條件如蒸發(fā)時(shí)的溫度、蒸發(fā)速度和空氣流動(dòng)速度等都必須保持一致，否則再現(xiàn)性不良。所用的瓷蒸發(fā)皿要經(jīng)過(guò)挑選，以保證其形狀、大小、厚薄盡可能一致。恒溫水浴應(yīng)盡可能采用水層較深的水浴，并且完全敞開(kāi)，將瓷蒸發(fā)皿直接漂浮在水面上。水浴的水面應(yīng)盡可能高，使蒸發(fā)皿不致被水浴的四壁擋住而影響空氣的流動(dòng)，以保證蒸發(fā)速度的一致。蒸發(fā)至干后繼續(xù)在同一溫度下保持15分鐘，使脫水完全。蒸發(fā)和脫水時(shí)的常用溫度是55℃±3℃，溫度更高時(shí)，可能導(dǎo)致B的損失。

②硬質(zhì)玻璃中常含有硼，所使用的玻璃器皿不應(yīng)與試樣溶液作長(zhǎng)時(shí)間接觸。加熱浸提土壤水溶性硼時(shí)，最好使用石英玻璃制的三角瓶。用其他玻璃的制品時(shí)，應(yīng)先進(jìn)行空白試驗(yàn)，觀察空白值的大小，決定其是否能用。用扣除空白的方法來(lái)消除玻璃器皿的污染有時(shí)是難于奏效的。在加熱溫度不高時(shí)，瓷器皿可用于B的測(cè)定。聚四氟乙烯制品是適用的。

③配制試劑及浸提用的水均須用石英蒸餾器重蒸餾過(guò)的水或用去離子水。

④若NO-3濃度超過(guò)20ppm，對(duì)B的比色測(cè)定有干擾，必須加Ca（OH）2使呈堿性反應(yīng)，在水浴上蒸發(fā)至干，再慢慢灼燒以破壞硝酸鹽。再用一定量的0.1NHCl溶解殘?jiān)?。吸?.00ml溶液進(jìn)行比色測(cè)定硼。

⑤若土壤中的水溶性硼含量過(guò)低，比色發(fā)生困難，可以準(zhǔn)確吸取較多的溶液，移入蒸發(fā)皿中，加少許飽和Ca（OH）2溶液使之呈堿性反應(yīng)，在水浴上蒸發(fā)至干。加入適當(dāng)體積（例如5.00ml）的0.1NHCl溶解，吸取1.00ml進(jìn)行比色。由于待測(cè)溶液的酸度對(duì)顯色有很大影響，所以標(biāo)準(zhǔn)系列也應(yīng)按同樣步驟處理。

⑥蒸發(fā)顯色以后，應(yīng)將蒸發(fā)皿從水浴中取出擦干，隨即放入干燥器內(nèi)，待比色時(shí)再隨時(shí)取出。蒸發(fā)皿不應(yīng)長(zhǎng)時(shí)間暴露在空氣中，以免玫瑰花青苷因吸收空氣中的水分而發(fā)生水解，使測(cè)定結(jié)果不準(zhǔn)確。

⑦顯色測(cè)定過(guò)程中，最好不要中途停頓。如因故必須暫停工作，應(yīng)在加入姜黃素以前暫停，而不要在加入姜黃素以后，否則會(huì)使結(jié)果不準(zhǔn)確。

⑧比色過(guò)程中，由于乙醇的蒸發(fā)損失，體積縮小，使溶液的吸收值發(fā)生改變，故比色工作應(yīng)盡可能迅速。比色時(shí)用酒精作參比，調(diào)整比色計(jì)吸收值的零點(diǎn)。