動(dòng)物實(shí)驗(yàn)AAV感染指南——腸道篇
感染腸道的常見(jiàn)方式有尾靜脈注射、腹腔注射、灌腸和腸系膜上動(dòng)脈（SMA）注射等。其中尾靜脈注射和腹腔注射操作簡(jiǎn)單，損傷性小，但是特異性較弱，感染效果不太理想。灌腸和SMA感染效果較好，本次將詳細(xì)介紹這兩種感染方法，文字描述最后有附上視頻教程鏈接，小伙伴可直接將網(wǎng)址復(fù)制到瀏覽器中觀看學(xué)習(xí)~
ps：尾靜脈注射和腹腔注射視頻教程附在文末了，有需要的小伙伴自取哦。
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灌腸的操作步驟[1]：
（1）小鼠禁食過(guò)夜，并預(yù)先用NAC和匹魯卡品處理以促進(jìn)腸道隱窩黏液排出。
（2）使用異氟醚將小鼠麻醉。
（3）使用1英寸不銹鋼的直圓針頭直腸注射300ul 20mM的NAC清洗結(jié)腸30min。
（4）再次麻醉小鼠，然后將聚乙烯軟管插入距離離肛門(mén)4厘米深的小鼠結(jié)腸部位，使用注射器緩慢注入適量的病毒；通過(guò)灌腸給予小鼠200μL?AAV（推薦注射劑量至少4×1010vg/只）。
（5）注射完畢后，將小鼠在垂直倒立狀態(tài)保持1分鐘以上，以確保病毒在結(jié)腸部位的均勻分布；
（6）待小鼠復(fù)蘇后可以恢復(fù)正常飲水及飲食。
注：灌腸需要通過(guò)小鼠肛門(mén)插管進(jìn)行，因此感染深度具有一定的局限性，感染結(jié)腸的概率更大。
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視頻教程：
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腸系膜動(dòng)脈（SMA）注射操作步驟[2]：
（1）將小鼠以右側(cè)臥位固定在手術(shù)板上，保持四肢松弛，放入含2-4.5% O2的異氟醚誘導(dǎo)室進(jìn)行麻醉。小鼠深度麻醉后，將其放在手術(shù)臺(tái)上，對(duì)小鼠手術(shù)區(qū)域做去毛及消毒處理。
注：為保持小鼠體溫，可在手術(shù)板下放置加熱墊。整個(gè)手術(shù)過(guò)程在手術(shù)顯微鏡下放大5-40倍進(jìn)行操作。
（2）手術(shù)開(kāi)始前，皮下注射丁丙諾啡（0.1mg/kg）進(jìn)行手術(shù)鎮(zhèn)痛；沿左腋線(xiàn)最后一個(gè)肋間隙和肋下區(qū)域注射布比卡因進(jìn)行局部鎮(zhèn)痛。
（3）沿著腋線(xiàn)和側(cè)腹，在脾臟區(qū)域的左側(cè)皮膚上開(kāi)一個(gè)1-2 cm的切口，切開(kāi)腹外斜肌，使用微型牽引器將皮膚和腹壁固定，并用溫鹽水紗布覆蓋小腸防止縮回，暴露SMA。
（4）在放大20倍的情況下，將SMA輕輕地從腹膜后剝離，在SMA的近端接頭周?chē)胖靡粋€(gè)小的穩(wěn)定接頭連接注射針，使用微血管夾暫時(shí)切斷腹主動(dòng)脈的血液供應(yīng)。
（5）將定制33號(hào)1/2針頭連接到250μl漢密爾頓TLL氣密性進(jìn)樣針注射器上，輕輕插入SMA進(jìn)行病毒注射（200μL體積的AAV，推薦注射劑量至少5×1010vg/只）。將固定帶輕扎血管，防止注射部位泄漏。
注：注射過(guò)程中使用顯微鏡觀察以確保注射可視準(zhǔn)確。
（6）注射后立即取下針頭，縫合注射部位。取下固定帶和微血管夾，使血液回流至小腸。使用無(wú)菌棉簽輕輕按壓注射部位進(jìn)行止血。
（7）在腹腔內(nèi)注射1ml無(wú)菌溫鹽水后，對(duì)小鼠進(jìn)行縫合。
（8）術(shù)后每15min對(duì)小鼠進(jìn)行一次監(jiān)測(cè)，直到小鼠能夠腹臥。每2小時(shí)對(duì)動(dòng)物進(jìn)行一次監(jiān)測(cè)，直至放回籠中。
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視頻教程：
https://www.jove.com/cn/v/60787/targeting-rat-s-small-bowel-long-term-infusion-into-superior
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使用灌腸感染腸道，推薦AAV1或AAV5，尾靜脈注射、腹腔注射和SMA更推薦使用AAV9。更多關(guān)于腸道感染的問(wèn)題歡迎咨詢(xún)漢恒生物！
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尾靜脈注射：
https://www.jove.com/cn/v/61961/a-contemporary-warmingrestraining-device-for-efficient-tail-vein
腹腔注射：
https://www.bilibili.com/video/BV1q7411y7fS/?spm_id_from=333.999.0.0&;vd_source=43ab5539ff4b103665aeb9d18e229474
參考文獻(xiàn)：
[1] Steven P , Annette M , Stacy P ,et al.Identification of adeno-associated viral vectors suitable for intestinal gene delivery and modulation of experimental colitis[J].American Journal of Physiology Gastrointestinal & Liver Physiology, 2012, 302(3):296-308. ????????.
[1] Porvasnik S L , Mah C , Polyak S .Targeting murine small bowel and colon through selective superior mesenteric artery injection[J].Microsurgery, 2010, 30(6):487-493.
