海星生物對(duì)病毒包裝和載體構(gòu)建有多年的技術(shù)經(jīng)驗(yàn)，現(xiàn)針對(duì)病毒包裝?、載體構(gòu)建我們整理了以下幾個(gè)常見(jiàn)問(wèn)題。供參考。

1.什么是MOI？

在微生物學(xué)中， MOI是病原體(如噬菌體或病毒、細(xì)菌等)與感染目標(biāo)(如細(xì)胞)的比率。對(duì)于病毒， MOI是病毒顆粒數(shù)量與特定空間中存在的目標(biāo)細(xì)胞數(shù)量的比率。通常可將某株細(xì)胞有80%被感染時(shí)所用的病毒顆粒數(shù)和細(xì)胞數(shù)目的比值作為該株細(xì)胞的MOI。

2.如何稀釋病毒？

您可使用完全培養(yǎng)基、PBS液等將病毒稀釋到需要的滴度。如將滴度為5 x109??2TU/ml的病毒稀釋到1 x109?TU/ml，則需取20 μl病毒液加入到80 μl的完全培養(yǎng)基中。

3.用于病毒感染的細(xì)胞接種量是多少？

根據(jù)細(xì)胞增殖的速度調(diào)整細(xì)胞接種量，以保證在感染后3天左右細(xì)胞剛好快長(zhǎng)滿培養(yǎng)皿底部為宜。針對(duì)大部分細(xì)胞系：傳代周期在2-3天，感染時(shí)細(xì)胞鋪板的密度保持在20-30%左右，則72h后細(xì)胞增殖后鋪板密度約在90%左右；針對(duì)某些原代細(xì)胞：由于細(xì)胞增長(zhǎng)緩慢，可以在接種時(shí)提高匯合度到50%～ 60%，但要確保在感染后3天時(shí)細(xì)胞匯合度達(dá)到90%～ 100%；針對(duì)非分裂細(xì)胞：如神經(jīng)元細(xì)胞，接種后不再增殖，此時(shí)可以按照80%的匯合度進(jìn)行接種。

4.如何提高病毒對(duì)細(xì)胞的感染效率？

病毒對(duì)細(xì)胞的感染效率受細(xì)胞自身生長(zhǎng)的狀態(tài)，細(xì)胞數(shù)量，細(xì)胞被病毒感染的難易程度等多個(gè)因素影響。因此保證細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好，輪廓清晰，合適的細(xì)胞密度，選擇最優(yōu)的感染條件（如合適的MOI值）可以更好的保證感染效率。對(duì)于懸浮細(xì)胞，可采用離心感染方法，減少病毒感染時(shí)的體積，從而提高感染效率。如可以在加入病毒后將細(xì)胞培養(yǎng)板密封，用離心機(jī)在1000g條件下離心1h，再放回培養(yǎng)箱中正常培養(yǎng)。

5.加入病毒病毒后，細(xì)胞死亡很厲害，該如何處理？

病毒有一定的細(xì)胞毒性，如果培養(yǎng)過(guò)程中細(xì)胞出現(xiàn)了明顯的病變或細(xì)胞狀態(tài)變差，建議將轉(zhuǎn)導(dǎo)時(shí)間縮短至5~8小時(shí)之間。或者調(diào)整并降低感染的MOI值，并且在感染后4小時(shí)、 8 小時(shí)、 12小時(shí)對(duì)細(xì)胞進(jìn)行觀察，若發(fā)現(xiàn)細(xì)胞狀態(tài)變差時(shí)，則需要立刻對(duì)細(xì)胞進(jìn)行換液操作，使用新鮮的完全培養(yǎng)液替換病毒感染培養(yǎng)液

6.細(xì)胞能被病毒感染，但為何GFP熒光很弱？

GFP病毒感染細(xì)胞后，細(xì)胞中熒光強(qiáng)度取決于病毒進(jìn)入到細(xì)胞的顆粒數(shù)、細(xì)胞本身的增殖狀態(tài)、細(xì)胞類(lèi)等因素。在增殖較慢的細(xì)胞中感染病毒后，?GFP蛋白表達(dá)達(dá)到峰值需要較長(zhǎng)的時(shí)間。?

7.腺病毒載體在體外實(shí)驗(yàn)中應(yīng)注意哪些問(wèn)題？

GFP病毒感染細(xì)胞后，細(xì)胞中熒光強(qiáng)度取決于病毒進(jìn)入到細(xì)胞的顆粒數(shù)、細(xì)胞本身的增殖狀態(tài)、細(xì)胞類(lèi)等因素。在增殖較慢的細(xì)胞中感染病毒后， GFP蛋白表達(dá)達(dá)到峰值需要較長(zhǎng)的時(shí)間。?

8.如何確定我所用的目的細(xì)胞是否可以被腺病毒感染？

腺病毒有廣泛的宿主范圍,它可以感染人類(lèi)或者其他哺乳動(dòng)物細(xì)胞系或原代細(xì)胞，包括可分裂的和不可分裂的細(xì)胞。只有少數(shù)細(xì)胞系不被感染，例如一些淋巴細(xì)胞系對(duì)腺病毒有更強(qiáng)的抵抗性。為了確認(rèn)所使用的目的細(xì)胞是否能夠被腺病毒感染，需要通過(guò)帶有標(biāo)記（如GFP）的腺病毒對(duì)目的細(xì)胞進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)。

作者：海星生物? ? ? ?

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