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CRISPR-Cas9基因編輯全面詳解

2023-08-30 10:24 作者:Elysia因你而在的故事  | 我要投稿

多位科學(xué)家曾因 CRISPR 基因編輯技術(shù)斬獲諾貝爾獎(jiǎng),這項(xiàng)技術(shù)也被《麻省理工學(xué)院技術(shù)評(píng)論》雜志評(píng)選為2023年十大突破性技術(shù)之一。現(xiàn)如今生命科學(xué)領(lǐng)域最火的技術(shù)之一便是基因編輯,2012年CRISPR-Cas9的工作原理被解析,稍后在2013年,華裔科學(xué)家張鋒首次將CRISPR-Cas9基因編輯技術(shù)應(yīng)用于哺乳動(dòng)物細(xì)胞,正式開啟了基因編輯的應(yīng)用之路,《Science》2017 年度突破、《Nature》2017 年度人物均授予了 CRISPR 相關(guān)技術(shù)的突破,2020年CRISPR技術(shù)獲得諾貝獎(jiǎng),短短不到十年時(shí)間CRISPR技術(shù)榮獲最高學(xué)術(shù)榮譽(yù),足以看出該技術(shù)的應(yīng)用潛力,基因編輯技術(shù)廣泛應(yīng)用于人、大鼠、小鼠、斑馬魚、果蠅、豬、水稻、小麥和擬南芥等動(dòng)植物(細(xì)胞)以及細(xì)菌等微生物的基因組靶向改造,并已在功能基因組研究、疾病防治、動(dòng)植物育種、動(dòng)物疾病模型開發(fā)、基因治療等領(lǐng)域展現(xiàn)出巨大的應(yīng)用前景。成為當(dāng)下科研工作者的新寵兒。

? ? ? 由于該項(xiàng)研究資料和學(xué)習(xí)平臺(tái)較少,信息技術(shù)不公開,培訓(xùn)學(xué)習(xí)迫在眉睫,特此誠(chéng)摯邀請(qǐng)您參加CRISPR-Cas9基因編輯技術(shù)專題線上課程,參會(huì)學(xué)員已達(dá)3000余名!學(xué)懂學(xué)會(huì)學(xué)透徹學(xué)以致用,做出有價(jià)值的科學(xué)研究, 能夠快速運(yùn)用到自己的科研項(xiàng)目和課題上,助力學(xué)員發(fā)表Nature、Science、Cell等正刊及子刊!(新技術(shù)加持下,用更少的經(jīng)費(fèi),發(fā)更高質(zhì)量的文章)

第一天

一. 基因編輯工具介紹

1. 基因編輯和轉(zhuǎn)基因是一樣的嗎?

2. 生活中的基因編輯與轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品

3. 基因編輯工具先驅(qū)-ZFNs和TALENs

4. 沒落的ZFNs和TALENs

5. TALENs,舊工具新用,細(xì)胞器編輯利器!

6. 強(qiáng)勢(shì)崛起的CRISPR系統(tǒng)

7. CRISPR系統(tǒng)家族介紹

8.?CRISPR-Cas9的工作原理

9. CRISPR-Cas12的工作原理

10. CRISPR系統(tǒng)的致命缺點(diǎn)

11. 如何選擇合適的CRISPR系統(tǒng)?

第二至三天

二. CRISPR系統(tǒng)可以做什么?

1. 基因敲除/基因敲入

i. 基因修復(fù)途徑介紹(NHEJ和HDR)

ii. Knock-in和Knock-out的簡(jiǎn)介

iii. Knock-in策略簡(jiǎn)介(HDR/Retron/雙pegRNA策略/GRAND/TJ-PE)? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ??

2. 多敲系統(tǒng)簡(jiǎn)介

3. CRISPRa/CRISPRi(基因激活與基因抑制)

i. dCas9-PVPR系統(tǒng)介紹

ii. dCas9-VP64/GI/SAM基因激活系統(tǒng)介紹

iii. 基因編輯招募系統(tǒng)介紹(Suntag/Moontag)

4. CRISPR系統(tǒng)的‘另類’應(yīng)用(循環(huán)打靶)

5. CBE系統(tǒng)的原理及其應(yīng)用

i. CBE系統(tǒng)進(jìn)化過程總結(jié)(CBEmax/每代優(yōu)化的元件及策略匯總)

ii. 基因組CBE編輯(植物育種/基因功能研究/臨床治療)

iii. 細(xì)胞器CBE編輯工具介紹(Ddda脫氨酶/MutH切口酶)

iv. CBE系統(tǒng)的脫靶效應(yīng)

6. ABE系統(tǒng)的原理及其應(yīng)用

i. PACE和PANCE人工定向蛋白進(jìn)化系統(tǒng)介紹及其他常規(guī)的蛋白進(jìn)化技術(shù)

ii. ABE系統(tǒng)的進(jìn)化過程總結(jié)(ABEmax/ABE8e每代優(yōu)化的元件及策略匯總)

iii. ABE系統(tǒng)的‘另類’應(yīng)用(基因失活/跳剪/介導(dǎo)C編輯)

iv. 雙堿基編輯系統(tǒng)(SWISS/STEME/A&C-BEmax/SPACE/ACBE)

7. PE系統(tǒng)的原理及其應(yīng)用

i. PE介導(dǎo)精準(zhǔn)編輯

ii. 編輯效率的影響因素(骨架二級(jí)結(jié)構(gòu)/PBS長(zhǎng)度/RTT模板)

iii. 雙pegRNA的原理及其應(yīng)用(基因組大片段插入)

iv. 基因組大片段刪除

v. 用于AAV遞送的PE系統(tǒng)

8. gGBE的原理及其應(yīng)用

i. 糖基化酶介紹(為什么可以介導(dǎo)堿基編輯?)

ii. gGBE的開發(fā)與應(yīng)用

iii. gGBE的后續(xù)發(fā)展預(yù)測(cè)

9. CRISPR-Case12的病毒檢測(cè)應(yīng)用

i. 原理介紹

ii. 應(yīng)用案例介紹

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第四天

三. CRISPR載體構(gòu)建(實(shí)操)

1. 敲除/堿基編輯載體構(gòu)建

i. 工具介紹

ii. 如何查看質(zhì)粒圖譜

iii. 基因靶點(diǎn)的選擇(CRISPR-GE等線上工具展示)

iv. sgRNA的引物設(shè)計(jì)

v. 模擬構(gòu)建(酶切載體/構(gòu)建體系講解)

vi. 菌落PCR

vii. 測(cè)序鑒定結(jié)果分析

2. PE系統(tǒng)的載體構(gòu)建

i. 引物設(shè)計(jì)工具的應(yīng)用

ii. 載體構(gòu)建演示

iii. 測(cè)序結(jié)果分析

3. 轉(zhuǎn)染陽(yáng)性檢測(cè)

4. 測(cè)序原理及結(jié)果查看

i. 一代測(cè)序原理

ii. Hi-TOM高通量測(cè)序

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?

第五天

四. 基因編輯在植物種的應(yīng)用

1. 基因功能研究

2. 創(chuàng)制新品種

五. 基因編輯在臨床上的應(yīng)用

1. 堿基編輯的臨床應(yīng)用

2. PE系統(tǒng)的臨床應(yīng)用

3. 遞送系統(tǒng)的介紹

六. 基因編輯在微生物中的應(yīng)用

1. 微生物遺傳學(xué)研究

2. 生物技術(shù)(可產(chǎn)生生物燃料/生物塑料/藥物等有用的化合物)

七. 機(jī)器學(xué)習(xí)在基因編輯領(lǐng)域的應(yīng)用

1. 基因編輯結(jié)果的預(yù)測(cè)

2. 編輯效率影響因素的探索

3.基因編輯輔助工具的開發(fā)? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ??

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CRISPR-Cas9基因編輯全面詳解的評(píng)論 (共 條)

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