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PCR實(shí)驗(yàn)室應(yīng)該如何去避免核酸氣溶膠假陽(yáng)性

2022-11-21 17:29 作者:莊言消毒  | 我要投稿

核酸檢測(cè)是新型冠狀病毒檢測(cè)的“金標(biāo)準(zhǔn)”,實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR法是臨床檢測(cè)常用方法,隨著各級(jí)實(shí)驗(yàn)室該方法的廣泛使用,大批量樣本的臨床檢測(cè),假陽(yáng)性也是不容忽視的問(wèn)題。熒光定量PCR假陽(yáng)性簡(jiǎn)單來(lái)說(shuō)就是在不該出現(xiàn)熒光信號(hào)的樣本中出現(xiàn)了熒光信號(hào),導(dǎo)致誤判斷陽(yáng)性結(jié)果。

出現(xiàn)假陽(yáng)性的原因主要有以下幾個(gè)方面:

一、引物設(shè)計(jì)不合適:選擇的擴(kuò)增序列與非目的擴(kuò)增序列有同源性,因而在進(jìn)行PCR擴(kuò)增時(shí),擴(kuò)增出的PCR產(chǎn)物為非目的基因序列。但在臨床實(shí)際中,由于基本使用的是成品試劑盒,引物設(shè)計(jì)不合適的情況一般不會(huì)出現(xiàn),但個(gè)別廠家試劑仍存在非特異性擴(kuò)增現(xiàn)象,建議在使用前進(jìn)行性能評(píng)價(jià),比對(duì)篩選。

二、靶序列或擴(kuò)增產(chǎn)物的交叉污染,這種污染有兩種原因:

1.是整個(gè)基因組或大片段的交叉污染導(dǎo)致假陽(yáng)性。

2.是空氣中的小片段核酸污染,雖然這些小片段比靶基因序列短,但有一定的同源性。互相拼接后與引物互補(bǔ)結(jié)合,可擴(kuò)增出PCR產(chǎn)物,而導(dǎo)致假陽(yáng)性的產(chǎn)生。在規(guī)范操作的前提下,應(yīng)該盡量避免第二種情況的發(fā)生。

三、標(biāo)本間交叉污染:標(biāo)本污染主要有收集標(biāo)本的容器被污染,或標(biāo)本放置時(shí),由于密封不嚴(yán)溢于容器外,或容器外粘有標(biāo)本而造成相互間交叉污染;標(biāo)本核酸模板在提取過(guò)程中,由于吸樣槍污染導(dǎo)致標(biāo)本間污染;有些微生物標(biāo)本尤其是病毒可隨氣溶膠或形成氣溶膠而擴(kuò)散,導(dǎo)致彼此間的污染。

四、PCR試劑的污染:主要是由于在PCR試劑配制過(guò)程中,由于加樣槍、容器、雙蒸水及其它溶液被PCR核酸模板污染。

五、實(shí)驗(yàn)室中克隆質(zhì)粒的污染:試劑盒中的陽(yáng)性對(duì)照參與核酸提取過(guò)程造成交叉污染,一些試劑盒為了監(jiān)控核酸提取過(guò)程的質(zhì)量,要求將試劑盒中的陽(yáng)性對(duì)照(含有目的基因的假病毒)與樣本一起進(jìn)行核酸提取,自動(dòng)化的核酸提取儀由于加溫、振動(dòng)等過(guò)程,在操作過(guò)程中氣溶膠會(huì)可能會(huì)污染提取儀。有的實(shí)驗(yàn)室可能會(huì)將提取的核酸樣本板加膜保存,以備擴(kuò)增,再次打開(kāi)封膜的樣本板時(shí)可能會(huì)造成交叉污染。因此,不建議對(duì)提取后的樣本核酸封膜保存,最好立即檢測(cè),同時(shí),應(yīng)對(duì)每一批提取后的儀器用75%酒精擦拭。

當(dāng)PCR實(shí)驗(yàn)結(jié)果出現(xiàn)假陽(yáng)性的時(shí)候,我們常常會(huì)考慮是不是引物、反應(yīng)液、移液器等污染模板,然后需要一一排查,費(fèi)時(shí)費(fèi)力。其實(shí)產(chǎn)生這一現(xiàn)象最常見(jiàn)的原因是 核酸氣溶膠 。離心機(jī)離心、劇烈地?fù)u動(dòng)反應(yīng)管、PCR開(kāi)蓋、移液器的反復(fù)吹打等會(huì)產(chǎn)生空氣與液體表面摩擦的情況,都會(huì)產(chǎn)生核酸氣溶膠,也就是實(shí)驗(yàn)室里(或移液器腔內(nèi))彌漫著含有長(zhǎng)短不一核酸片段的小顆粒,這些小顆粒沉降到樣本中導(dǎo)致最后擴(kuò)增出了假陽(yáng)性熒光曲線。

可想而知,這些核酸小顆粒還會(huì)落到實(shí)驗(yàn)臺(tái)面、PCR儀、移液器、吸頭盒等等地方,如果我們不注意,這些核酸小顆粒就會(huì)日積月累地積聚,當(dāng)實(shí)驗(yàn)室里核酸氣溶膠的濃度達(dá)到一定濃度,就會(huì)造成實(shí)驗(yàn)室的污染進(jìn)而產(chǎn)生PCR實(shí)驗(yàn)結(jié)果的假陽(yáng)性。

傳統(tǒng)的實(shí)驗(yàn)室核酸污染清除方式都存在一定程度的缺陷,而且處理過(guò)程人員參與其中,增加二次污染的風(fēng)險(xiǎn),同時(shí)也大大降低了實(shí)驗(yàn)檢測(cè)任務(wù)的進(jìn)行,潤(rùn)聯(lián)環(huán)保最新推出的氣溶膠去除劑NOVOCIDE AIR密閉了核酸清除帶來(lái)的二次隱患,并充分利用其干霧冷蒸發(fā)設(shè)備,全智能化對(duì)實(shí)驗(yàn)室核酸污染進(jìn)行清除,時(shí)間短,效率高。

具備以下特點(diǎn):

1 、同時(shí)對(duì)物表及空間氣溶膠核酸污染進(jìn)行全方位清除

2、通常清除時(shí)間控制在2小時(shí)左右

3、可針對(duì)實(shí)驗(yàn)室核酸污染預(yù)防及核酸污染后的應(yīng)急處理

4、具備完善的驗(yàn)證方案

潤(rùn)聯(lián),提供PCR實(shí)驗(yàn)室氣溶膠去除劑和去除儀,可解決氣溶膠污染問(wèn)題,避免假陽(yáng)性和CT值翹尾。我們不僅提供專業(yè)的產(chǎn)品,我們還提供專業(yè)的方案和服務(wù)。歡迎大家一起留言探討!


PCR實(shí)驗(yàn)室應(yīng)該如何去避免核酸氣溶膠假陽(yáng)性的評(píng)論 (共 條)

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