動(dòng)物免疫

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?（1）動(dòng)物的選擇目前常用的免疫動(dòng)物為來自BALB/c小鼠和Lou大鼠以制備小鼠單克隆抗體和大鼠單克隆抗體。

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?（2）免疫方法：常用的免疫方法有以下三種

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?體內(nèi)免疫法：通常指皮下，肌肉及腹腔免疫，多適用于各種顆粒性抗原和可溶性抗原。一般顆粒性抗原細(xì)胞的用量為2×107，且不需要加佐劑；可溶性抗原用量一般情況下不超過100μL，并需要加適宜的免疫佐劑。

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?體外免疫法：從脾臟或者外周血分離B淋巴細(xì)胞在體外與抗原共同培養(yǎng)。此方法多用于制備單克隆抗體，如乙肝疫苗基礎(chǔ)免疫后，取人外周血分離B淋巴細(xì)胞與乙肝表面抗原共同培養(yǎng)，制備人抗乙肝單抗。

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?脾內(nèi)免疫法：借助外科手術(shù)暴露動(dòng)物的脾臟，將抗原直接注入脾臟。此方法一般需抗原量少，適用于一些來源有限且昂貴的抗原免疫。

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?（3）免疫過程：

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?可溶性抗原加佐劑后，皮下多點(diǎn)注射，至少三點(diǎn)以上，基礎(chǔ)免疫一般4-6周，同劑量抗原加強(qiáng)免疫后，于融合前3-4天，靜脈加強(qiáng)。

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?顆粒性抗原基礎(chǔ)免疫2-3周，間隔一周加強(qiáng)免疫，2-3次，于融合前3-4天用相應(yīng)抗原靜脈加強(qiáng)后取脾B淋巴細(xì)胞用于融合。

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?骨髓瘤細(xì)胞的選擇

要取得良好的細(xì)胞融合效果，所用的雜交瘤細(xì)胞必須處于良好的生理狀態(tài)，處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的瘤細(xì)胞最佳。細(xì)胞數(shù)低于104/mL時(shí)，細(xì)胞生長(zhǎng)緩慢，一般在104-5×105/mL時(shí)呈對(duì)數(shù)生長(zhǎng)，此時(shí)細(xì)胞渾圓透亮，大小均一，排列整齊。當(dāng)細(xì)胞密度超過106/mL以上時(shí)，細(xì)胞停止分裂，細(xì)胞發(fā)暗，皺縮。因此一般細(xì)胞傳代選擇(1-5)×105/mL的濃度，且融合時(shí)活細(xì)胞數(shù)至少應(yīng)該大于90%。

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?一株好的骨髓瘤細(xì)胞株應(yīng)該具備以下幾個(gè)特點(diǎn)：1）穩(wěn)定，易培養(yǎng)；2）自身不分泌免疫球蛋白；3）融合率高；4）屬于HGPRT缺陷株，便于HAT培養(yǎng)基篩選雜交瘤細(xì)胞。