一、凋亡過(guò)程中磷脂酰絲氨酸外翻實(shí)驗(yàn)原理
凋亡過(guò)程中磷脂酰絲氨酸外翻實(shí)驗(yàn)中磷脂酰絲氨酸（PS）通常位于細(xì)胞膜的內(nèi)側(cè)，但在凋亡的早期階段，PS會(huì)從細(xì)胞膜的內(nèi)側(cè)翻轉(zhuǎn)到表面，暴露在細(xì)胞外環(huán)境中。膜粘連蛋白-5是一種鈣離子依賴性磷脂結(jié)合蛋白，可以高親和力與PS特異性結(jié)合。?膜粘連蛋白-5標(biāo)記有熒光素，標(biāo)記的膜粘連蛋白-5用作熒光探針，可通過(guò)熒光顯微鏡檢測(cè)細(xì)胞凋亡的發(fā)生。
碘化丙啶（PI）是一種核酸染料。它不能穿透完整的細(xì)胞膜。然而，在細(xì)胞凋亡和死亡細(xì)胞的中后期，PI可以穿透細(xì)胞膜并使細(xì)胞核染成紅色。因此，匹配的膜粘連蛋白-5和PI可以將凋亡早期和晚期的細(xì)胞與死細(xì)胞區(qū)分開(kāi)。

二、凋亡過(guò)程中磷脂酰絲氨酸外翻實(shí)驗(yàn)所需的材料
PBS緩沖液，碘化丙啶（PI），胰蛋白酶，結(jié)合緩沖液，膜粘連蛋白-5，熒光顯微鏡等

三、凋亡過(guò)程中磷脂酰絲氨酸外翻實(shí)驗(yàn)步驟
1懸浮細(xì)胞染色用PBS洗滌正常培養(yǎng)和誘導(dǎo)凋亡的懸浮細(xì)胞（0.5?1×106）兩次，加入100ul結(jié)合緩沖液和10ulFITC標(biāo)記的膜粘連蛋白-5，在室溫下避光30分鐘，加入5ul PI（50ug / ml），在黑暗中反應(yīng)5分鐘，加入400ul結(jié)合緩沖液，并使用FACScan立即進(jìn)行流式細(xì)胞儀定量檢測(cè)（通常不超過(guò)1h）。同時(shí)，用一管不添加膜粘連蛋白-5-FITC和PI用的細(xì)胞液作陰性對(duì)照。
2首先用0.25％的胰蛋白酶來(lái)消化貼壁培養(yǎng)的細(xì)胞，之后進(jìn)行的染色，洗滌，分析和上述懸浮細(xì)胞的方法相同。
3爬片細(xì)胞的染色和上述懸浮細(xì)胞的方法相同，最后用熒光顯微鏡和共聚焦激光掃描顯微鏡觀察。

四、凋亡過(guò)程中磷脂酰絲氨酸外翻實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)
1.整個(gè)操作應(yīng)盡可能輕柔，不要用力吹電池。
2.在操作過(guò)程中，請(qǐng)遠(yuǎn)離光線，并在反應(yīng)后一小時(shí)內(nèi)盡快進(jìn)行測(cè)試。

五、細(xì)胞凋亡中磷脂酰絲氨酸外翻實(shí)驗(yàn)試劑清單

序號(hào)?產(chǎn)品名? ? ? ? ? ? ?貨號(hào)

1.? ? ?PBS緩沖液? ? ? ?HC2031
2.? ? ?碘化丙啶PI染色液?HC0616
3.? ? ?胰蛋白酶? ? ? ? ? ?SS2236